猫肠上皮细胞的原代培养及cDNA文库的构建
目的 建立猫肠上皮细胞(Intestinal epithelial cells,IECs)培养体系,构建其酵母双杂交cDNA文库,为筛选弓形虫毒性因子在终末宿主的互作蛋白奠定基础.方法 分别采用组织块法以及低浓度胶原蛋白酶Ⅺ和中性蛋白酶Ⅰ联合消化法进行猫IECs的原代培养,通过形态学观察及细胞免疫组织化学方法鉴定后提取mRNA,运用SMART技术合成cD-NA第一链,以LD-PCR扩增获得双链cDNA(ds cDNA),通过同源重组方法在酵母菌株Y187中构建猫IECs的cDNA文库,计算文库的容量,以酵母菌液PCR检测插入片段的大小分布.结果 两种培养方法效果表明酶联合消化法更为有效.本研究建立了连续培养猫IECs体系,培养出高纯度的猫IECs,用其构建的cDNA文库容量为1.1×106,滴度为2.8×109 cfu/ml,插入片段大小在0.5～2.0 kb之间.结论 培养的原代猫IECs构建的cDNA文库符合酵母双杂交筛选互作因子标准,这为筛选弓形虫终末宿主的毒性因子互作蛋白奠定了基础.
弓形虫、肠上皮细胞、猫、原代培养、酵母双杂交、cDNA文库
29
R382.5(医学寄生虫学)
山东省自然科学基金项目ZR2014YL039;国家自然科学青年基金31300617;山东省医药卫生科技发展计划项目WSO370;山东省优秀中青年科学家科研奖励基金博士基金BS2013SW015;国家自然科学青年基金31502057;山东省医学科学院医药卫生科技创新工程
2017-09-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共5页
464-467,474
