刚地弓形虫硫氧还蛋白基因的克隆表达及鉴定
目的:克隆刚地弓形虫硫氧还蛋白(Thioredoxin,Trx)基因,构建原核表达载体,通过诱导表达和纯化蛋白,免疫家兔制备多克隆抗体。方法采用PCR技术扩增刚地弓形虫Trx基因,克隆至原核表达载体pET?28a(+)中,转化大肠埃希菌(E. coli)Rosetta,用IPTG诱导目的蛋白表达,采用镍亲和层析法获得纯化蛋白并免疫家兔制备多克隆抗体。利用Western blotting技术鉴定多克隆抗体的特异性。结果成功从刚地弓形虫cDNA中扩增出Trx目的基因,构建了Trx/pET?28a(+)重组质粒,获得抗Trx重组蛋白的多克隆抗体。Western blotting技术检测出弓形虫Trx蛋白的特异性条带。结论用制备的兔抗Trx多克隆抗体能检测弓形虫Trx在速殖子内的表达,为进一步深入研究刚地弓形虫Trx功能奠定了基础。
刚地弓形虫、硫氧还蛋白、克隆、原核表达、鉴定、多克隆抗体
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R382.5(医学寄生虫学)
国家自然科学基金81301453;卫生部寄生虫病原与媒介生物学重点实验室开放课题WSBKTKT201302;中国博士后科学基金特别资助2015T80518;中国博士后科学基金2014M561598;江苏省博士后科研计划1402171C;江苏大学高级人才启动基金13JDG023、13JDG127
2016-06-28(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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