日本血吸虫分泌蛋白和外膜蛋白的原核表达与鉴定
目的 原核表达和鉴定含有编码日本血吸虫分泌蛋白、外膜蛋白基因的重组质粒,为高通量筛选日本血吸虫病疫苗或诊断抗原奠定基础.方法 将前期构建的28个含有分泌蛋白、外膜蛋白编码基因序列的pET32(+)重组质粒通过化学法转到大肠杆菌(E.coli)BL21(DE3)菌株中进行培养,加入异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达.对诱导表达后的细菌进行超声破壁,以12% SDS-PAGE分别对菌液、上清及沉淀进行检测,判断目的蛋白的大小和表达分布情况.利用蛋白芯片结合抗His标签荧光抗体对重组融合蛋白表达情况做进一步鉴定.结果 在IPTG终浓度0.1 mmol/L、37℃、200 r/min和4h的诱导条件下,含有编码分泌蛋白、外膜蛋白序列的重组质粒能够在E.coli BL21 (DE3)中高效表达.SDS-PAGE显示28个融合蛋白具有不同程度的表达,其中2个分布在上清中,26个分布在沉淀中,条带大小与预测大小一致.蛋白芯片成功检测到His抗体荧光信号,进一步证实了目的蛋白的表达情况.结论 利用E.coli成功表达了一批编码日本血吸虫分泌蛋白、外膜蛋白的融合蛋白,为后续疫苗和免疫诊断研究奠定了基础.
日本血吸虫、分泌蛋白、外膜蛋白、原核表达、蛋白芯片
28
R383.24(医学寄生虫学)
湖北省卫生计生血防专项WJ2015XB032
2016-06-29(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
共6页
156-160,181