恶性疟原虫配子体期特异性蛋白Pfgdv1克隆表达及鉴定

摘要：

目的：克隆恶性疟原虫配子体期特异性基因（Plasmodium falciparum gametocyte development 1 gene，Pfgdv1），体外表达和鉴定重组Pfgdv1蛋白。方法通过PCR法从恶性疟原虫感染病人血液DNA样本中扩增Pfgdv1基因，插入到原核表达载体pET28a（+），构建pET28a?Pfgdv1重组表达质粒，转化至大肠埃希菌（E. coli）BL21（DE3+），通过异丙基?β?D?硫代吡喃半乳糖苷诱导表达重组蛋白，经Ni+?亲和层析柱纯化重组蛋白，纯化产物经十二烷基磺酸钠?聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS?PAGE）和 Western blotting 鉴定。结果 PCR 扩增的 Pfgdv1基因长度约为1.65 kb，重组 pET28a?Pfgdv1质粒构建成功，插入方向正确无框移，转化至E. coli BL21（DE3+）所表达的重组蛋白分子量约为67 kDa，且能被抗His标签单克隆抗体识别。结论成功克隆了Pfgdv1基因，表达并纯化了重组Pfgdv1蛋白，为进一步研究恶性疟原虫配子体期传播阻断疫苗奠定了基础。

关键词：恶性疟原虫、Pfgdv1、配子体、传播阻断疫苗、原核表达

分类号：R382.31(医学寄生虫学)

资助基金：蚌埠医学院研究生科研创新计划资助项目Byycx1402；安徽省教育厅自然科学研究重点项目KJ2012-A-200；安徽省大学生创新训练计划项目AH201410367046、AH201410367041；国家级大学生创新训练计划项目201410367046、201410367041

在线出版日期：2016-03-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：34-38