细粒棘球绦虫丙酮酸脱氢酶的重组表达及生物信息学分析
目的 克隆表达细粒棘球绦虫丙酮酸脱氢酶(EgPDH)基因,并对其进行生物信息学预测与分析.方法 提取细粒棘球绦虫Total-RNA并反转录成cDNA,以此为模板扩增目的基因.将目的基因连接至pET28b构建重组质粒并转化大肠杆菌BL21(DE3)进行重组表达.采用SignalP4.1、TMHMMsever v.2.0和TargetP 1.1对EgPDH编码蛋白序列分别进行信号肽、跨膜区及亚细胞定位的预测.采用SMART分析EgPDH编码蛋白结构域,用BLASTP和GeneDoc进行EgPDH同源序列比对及保守位点分析,并采用MEGA6软件邻接法构建系统进化树.结果 成功克隆并构建重组质粒pET28b-EgPDH,目的基因大小约1 080 bp,重组蛋白以可溶性形式表达.EgPDH为信号肽的分泌蛋白,并含转酮酶结构域,其高度保守酶活性位点分别为Glu57、Leu22、Iie86、Phe114.系统进化树分析显示EgPDH与多房棘球绦虫PDH亲缘关系最近.结论 成功克隆表达了细粒棘球绦虫EgPDH基因并进行了生物信息学预测分析,为进一步研究该蛋白功能奠定了基础.
细粒棘球绦虫、丙酮酸脱氢酶、克隆、表达、生物信息学
27
R383.3+3(医学寄生虫学)
国家自然科学基金81201315;国家科技重大专项2012ZX10004-220;卫生部寄生虫与媒介生物学重点实验室开放课题WSB-KTKT201304
2015-10-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共5页
376-380
