基于A1E3及B1C4单克隆抗体检测日本血吸虫循环抗原ELISA法的建立及现场初步应用

摘要：

目的：建立基于A1E3及B1C4单克隆抗体检测日本血吸虫循环抗原的夹心酶联免疫吸附试验（ELISA），并对其应用情况进行初步评价。方法采用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和免疫印迹试验（Western blot-ting）对A1E3及B1C4单克隆抗体进行特性分析，用ELISA法测定B1C4、A1E3单克隆抗体效价。采用棋盘格滴定法确定双单抗夹心ELISA法检测循环抗原的最佳工作浓度。在最佳条件下，分别检测20份急性血吸虫病病人血清、46份慢性血吸虫病病人血清及20份正常人血清，评价其检测敏感性和特异性。用建立的双单抗夹心ELISA法和市售检测血吸虫循环抗原的ELISA试剂盒检测湖北省江陵县IHA阳性血吸虫病病人血清72份，以评估双单抗夹心ELISA法的检测效能。结果经SDS-PAGE和Western blotting分析，纯化后的A1E3及B1C4在相对分子质量（Mr）88000和52000处各有一条清晰重链，在Mr 20000处有一条相同的轻链，且A1E3及B1C4可与可溶性虫卵抗原（SEA）及急性血吸虫病病人血清发生特异性反应。B1C4单抗效价可达1∶105，A1E3单抗效价可达1∶30000。用B1C4、A1E3双单抗夹心ELISA法检测急、慢性血吸虫病病人血清阳性率分别为100%和86.9%，检测20份正常人血清特异性为100%。双单抗夹心ELISA法及市售ELISA试剂盒检测日本血吸虫循环抗原阳性率分别为45.8%及43.1%。结论成功建立了基于A1E3及B1C4双单抗夹心ELISA法，该法检测日本血吸虫循环抗原具有较高的敏感性及特异性。

关键词：日本血吸虫、可溶性虫卵抗原、单克隆抗体、酶联免疫吸附试验

分类号：R383.24(医学寄生虫学)

资助基金：国家重大科技专项2008ZX10004011、2012ZX10004220

在线出版日期：2014-02-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：42-45,89