华支睾吸虫半胱氨酸蛋白酶两种表达方式的比较

摘要：

目的 比较原核和真核2种表达系统重组表达华支睾吸虫半胱氨酸蛋白酶方法的优劣和目的产物的血清免疫学检测效果.方法 根据已知的华支睾吸虫半胱氨酸蛋白酶序列分别设计引物扩增目的基因,与相应的表达载体相连分别构建原核表达质粒pET28a-CP和真核表达质粒pPIC9K-CP,双酶切及测序鉴定后,将正确的重组质粒分别转入大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3)和毕赤酵母GS115中诱导表达、纯化；将获得的纯化蛋白采用ELISA方法检测华支睾吸虫病人血清和正常人血清,比较诊断效果.结果 原核表达系统表达的华支睾吸虫半胱氨酸蛋白酶以包涵体形式存在,表达量为6.84mg/L;真核表达系统表达量达到65.00mg/L,且为可溶性蛋白；两者检测华支睾吸虫病的敏感性分别为95.00％ (57/60)和93.30％ (56/60),特异性分别为91.67％(77/84)和94.10％(79/84),差异均无统计学意义(P均＞0.05).结论 真核表达华支睾吸虫半胱氨酸蛋白酶较原核表达系统具有更高的应用价值.

关键词：华支睾吸虫、半胱氨酸蛋白酶、原核表达系统、真核表达系统、免疫诊断

所属期刊栏目：24

分类号：R383.22(医学寄生虫学)

在线出版日期：2012-11-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：450-454