日本血吸虫40kDa热休克蛋白对巨噬细胞活化的影响

摘要：

目的 构建pGEX-6P-1-SjHSP40(SjHSP40)融合表达载体并在大肠埃希菌(Escherich coli)内进行原核表达及重组蛋白纯化,以探讨SjHSP40对巨噬细胞活化的影响.方法 以PCR方法扩增SjHSP40基因片段,将其克隆人原核表达质粒pGEX-6P-1,经测序验证后转化入E.coli BL21 (DE3)中.重组蛋白经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达后以Glutathione-Sepharose 4B亲和柱进行纯化.所得产物GST-SjHSP40进行十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、Western blot鉴定.将此融合蛋白负载巨噬细胞48 h后,用流式细胞术检测巨噬细胞表面分子.结果 测序结果表明,本研究成功构建了pGEX-6P-1-SjHSP40原核表达载体,经IPTG诱导表达出融合蛋白.Western blot显示该融合蛋白能被抗GST抗体特异性识别.与GST等对照组相比,此融合蛋白负载的巨噬细胞表面共刺激分子(CD40、CD80、CD86)及MHCⅡ分子表达显著上调.结论 SjHSP40可显著上调巨噬细胞表面共刺激分子(CD40、CD80、CD86)及MHCⅡ分子的表达,提示其可在一定程度上使巨噬细胞活化.

关键词：日本血吸虫、热休克蛋白、融合蛋白、原核表达、巨噬细胞活化

所属期刊栏目：24

分类号：R383.24(医学寄生虫学)

资助基金：国家自然科学基金81071385、30872206

在线出版日期：2012-08-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：137-141,149