抗日本血吸虫14-3-3蛋白单克隆抗体5C6抗原识别表位的鉴定

摘要：

目的 采用噬菌体展示肽技术鉴定抗日本血吸虫14-3-3蛋白单克隆抗体5C6的抗原识别表位.方法 将纯化的抗日本血吸虫14-3-3蛋白单克隆抗体5C6作为固相配基筛选噬菌体随机展示12肽库,按照吸附-洗脱-扩增的淘洗过程进行3轮生物淘洗,富集特异性结合的噬菌体颗粒.随机挑取第3轮洗脱的独立噬菌体克隆,分别依次进行噬菌体扩增、基因组DNA抽提和DNA序列分析.选择外源性插入DNA序列完全相同或高度相似的同源性噬菌体,采用ELISA及免疫印迹分析对其免疫反应性作进一步鉴定,以确定单克隆抗体5C6的抗原识别表位.结果 第3轮淘洗物中33个独立噬菌体克隆的DNA测序结果显示,其中25个噬菌体编码外源性插入肽的核酸序列均为5′-CCACCTAGTAGCAGACCGATTCTCAGTCGAAGGAAA-3′,其对应的演绎氨基酸序列为PPSSRPILSRRK,该肽与日本血吸虫信号蛋白14-3-3及自然界其他已知蛋白的氨基酸序列均无同源性.免疫印迹试验证实此短肽可被自然感染的日本血吸虫病人血清所识别,而不与健康人血清反应.结论 本研究成功鉴定了抗日本血吸虫14-3-3蛋白单克隆抗体5C6所识别的模拟抗原表位,并证明该表位为空间构像表位.

关键词：日本血吸虫、信号传导蛋白14-3-3、单克隆抗体、噬菌体随机展示肽库、模拟表位、生物淘洗

所属期刊栏目：24

分类号：R383.24(医学寄生虫学)

资助基金：国家重大科技专项2008ZX10004-11;国家自然科学基金30972581;江苏省自然科学基金BK2008110;江苏省科技厅公益专项BM2007704;江苏省卫生厅科技项目H201066;江苏省卫生厅预防医学项目YZ201030

在线出版日期：2012-05-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：45-49