日本血吸虫硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶的表达及特性分析

摘要：

目的 制备具有生物活性的重组日本血吸虫硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶(SjTGR)硒蛋白.方法 采用PCR法,在SjTGR基因开放阅读框的末端融合大肠埃希菌(E.coli)硒蛋白转译的硒代半胱氨酸插入序列以构建一个嵌合基因,将此嵌合基因亚克隆到表达载体pET-41a中形成重组表达质粒SjTGR-pET-41a.将重组表达质粒SjTGR-pET-41a和质粒pSU ABC共转化到E.coli BL21中,用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达SjTGR蛋白.用阿糖胞苷-2',5'-二磷酸琼脂糖凝胶通过亲和层析从表达产物中纯化重组SjTGR蛋白.以重组SjTGR免疫小鼠制备TGR多克隆血清,免疫印迹试验分析日本血吸虫体内是否存在天然TGR.采用生物化学方法分析重组SjTGR硫氧还蛋白还原酶、谷胱甘肽还原酶、谷氧还蛋白的酶活性.结果 含有E.coli硒代半胱氨酸插入序列的SjTGR嵌合基因构建成功.含SjTGR基因的重组质粒SjTGR-pET-41a的转化子细菌在静止生长期经IPTG诱导,24℃培养24 h可表达出可溶性SjTGR蛋白,质粒pSU ABC表达产物可促进硒代半胱氨酸整合,增加硒蛋白的产量.免疫印迹试验结果显示,纯化重组SjTGR多克隆抗体可以识别血吸虫成虫体内天然的TGR.生化分析结果显示,SjTGR是一种具有硫氧还蛋白还原酶、谷胱甘肽还原酶、谷氧还蛋白活性的多功能酶.结论 具有生物活性的SjTGR已被成功表达,为进一步研究其功能与应用价值奠定了基础.

关键词：日本血吸虫、硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶、表达、纯化、酶活性

所属期刊栏目：23

分类号：R383.24(医学寄生虫学)

资助基金：国家自然科学基金30972581;江苏省自然科学基金BK2008110;国家科技重大专项2008ZX10004-011;江苏省科技厅公益专项BM2007704;江苏省医学重点人才基金RC2007095

在线出版日期：2011-12-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：412-418