抗日本血吸虫重组信号蛋白14-3-3单克隆抗体的制备和鉴定

摘要：

目的 制备抗日本血吸虫重组信号蛋白14-3-3单克隆抗体,并鉴定抗体性质.方法 以重组表达纯化的日本血吸虫信号蛋白14-3-3为抗原免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备单克隆抗体,采用酶联免疫吸附试验及免疫印迹法对获得的单克隆抗体进行类和亚类、效价、浓度、纯度、亲和常数、特异性和检测灵敏度的测定与鉴定.结果 共获得6株针对日本血吸虫信号蛋白14-3-3的单克隆抗体,分别为5G9、3F1、3F7、5C6、5D1和1G6,抗体类型分别为IgG1、IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG1和IgG1.对其中的单克隆抗体5G9分析显示,制备的腹水抗体效价为1:1.28×105,亲和层析纯化后的浓度为5.3 mg/ml,纯度＞95%,亲和常数为5.1×107mol/L.免疫印迹试验结果表明,该单克隆抗体可与体外重组表达纯化的日本血吸虫14-3-3蛋白特异性结合,同时也能与日本血吸虫可溶性虫卵抗原、成虫排泄分泌抗原和成虫抗原特异性反应,而与大肠埃希菌、健康人血清和华支睾吸虫抗原均无明显交叉反应.HRP标记的单克隆抗体5G9检测14-3-3蛋白的灵敏度为31.25 ng/ml.结论 本研究获得了6株能稳定分泌抗日本血吸虫14-3-3蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株,为建立新的日本血吸虫活动性感染检测方法奠定了良好的基础.

关键词：日本血吸虫、14-3-3蛋白、单克隆抗体、制备、鉴定

所属期刊栏目：22

分类号：R383.24(医学寄生虫学)

资助基金：国家重大科技专项2008ZX10004-11;江苏省医学重点人才基金RC2007095;江苏省科技厅公益专项BM2007704;江苏省卫生厅项目H200738

在线出版日期：2011-10-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：437-441