东方田鼠肺脏T7噬菌体展示cDNA文库的构建

摘要：

目的 构建东方田鼠肺脏T7噬菌体展示cDNA文库,为筛选东方田鼠抗血吸虫感染抗性相关基因奠定基础.方法 用TRIzol试剂提取东方田鼠肺脏总RNA,分离纯化mRNA,经反转录合成双链cDNA.在双链cDNA 末端加上定向EcoRⅠ/Hind Ⅲ接头并用EcoRⅠ和Hind Ⅲ消化,使其两端分别带EcoRⅠ和Hind Ⅲ黏性末端.用Mini Column纯化,收集300 bp以上的双链cDNA 片段,再连接于带有EcoRⅠ和Hind Ⅲ末端的T7 Select 10-3b载体,经体外包装后,以BLT5403为受体菌构建T7噬菌体展示cDNA文库.结果 经测定,库容量为1.5×106 pfu,扩增后文库滴度为1.1×1012 pfu/ml.对从原始文库中随机挑取的100个噬菌斑进行PCR鉴定,重组率为91%,阳性克隆片段长度分布在200～1500 bp,其中有90%的插入片段＞300 bp.结论 成功构建了东方田鼠肺脏T7噬菌体展示cDNA文库.

关键词：日本血吸虫、T7噬菌体展示cDNA文库、东方田鼠、肺脏

所属期刊栏目：19

分类号：R383.24(医学寄生虫学)

资助基金：科技部科技基础条件平台建设计划2005DKA21104;上海市科委资助项目054909002

在线出版日期：2007-09-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：252-256