日本血吸虫3-磷酸甘油醛脱氢酶的克隆表达及结构预测

摘要：

目的 克隆、表达日本血吸虫(大陆株)3-磷酸甘油醛脱氢酶(SjcGAPDH)编码基因并作结构预测.方法 将编码SjcGAPDH的pBluescript质粒用限制性内切酶Xho Ⅰ和Sac Ⅰ消化后,收集目的片段,与经同样酶切的原核表达载体pET28b连接,筛选重组克隆并测序,将正确的重组质粒转化入BL21(DE3)感受态细菌,异丙基-β-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组蛋白.用GeneRunner 软件对该蛋白的结构及抗原表位进行预测.结果 十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)观察到大小约42.7 kDa的特异性蛋白条带,与预计一致.免疫印迹试验(Western blot)结果表明致弱尾蚴免疫兔血清可识别该重组蛋白.结构预测表明SjcGAPDH的第50～70、102～122、135～148、165～175、187～205、254～272、278～285位氨基酸区域可能为蛋白质的抗原优势区域.结论 SjcGAPDH编码基因克隆、表达获得成功,为开展该分子功能和免疫原性研究奠定了基础,对GAPDH的结构和性质预测为探索该蛋白的抗原优势表位提供了理论依据.

关键词：日本血吸虫、3-磷酸甘油醛脱氢酶、克隆、表达

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分类号：R383.24(医学寄生虫学)

资助基金：国家自然科学基金30371262;国家高技术研究发展计划863计划2006AA02Z444;2004AA215240;2004AA2Z3520;上海市科委资助项目03DZ19231;上海市生物医药重点科技攻关项目064319026

在线出版日期：2007-07-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：170-174