血吸虫硫氧还蛋白免疫原性研究Ⅰ日本血吸虫硫氧还蛋白DNA疫苗的构建和鉴定

摘要：

目的构建日本血吸虫(大陆株)硫氧还蛋白(Trx)DNA疫苗(pcDNA3-SjcTrx),并进行分子生物学鉴定.方法根据日本血吸虫菲律宾株Trx基因序列设计一对引物,上游引物引入BamH I酶切位点和起始密码子ATG,下游引物引入EcoR I酶切位点和终止密码子TCA.以日本血吸虫大陆株成虫总RNA为模板,经反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增日本血吸虫大陆株Trx(SjcTrx)编码基因.经双酶切并纯化的PCR产物与经双酶切纯化的pcDNA3质粒DNA片段用T4DNA连接酶连接,克隆入真核表达载体pcDNA3,构建重组质粒pcDNA3-SjcTrx,并经限制性内切酶双酶切、琼脂糖凝胶电泳、PCR检测和核苷酸序列测定进行鉴定.结果SjcTrx编码基因RT-PCR产物约334 bp,构建的pcDNA3-SjcTrx重组质粒DNA经限制性内切酶双酶切和PCR扩增产物于琼脂糖凝胶电泳均观察到相同大小基因片段,根据核苷酸序列测定结果推导的氨基酸序列与日本血吸虫菲律宾株和曼氏血吸虫Trx分别有97%和43%的同源性.结论日本血吸虫(大陆株)硫氧还蛋白DNA疫苗构建成功,为开展动物保护性免疫试验创造了条件.

关键词：日本血吸虫、硫氧还蛋白、真核表达载体、核酸疫苗、小鼠、免疫

所属期刊栏目：17

分类号：R383.24(医学寄生虫学)

资助基金：国家高技术研究发展计划863计划2004AA215240,2004AA2Z3520;国家自然科学基金30371262;上海市科委资助项目03DZ19231

在线出版日期：2005-09-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：250-254