日本血吸虫SjPGK基因克隆和序列分析

摘要：

目的克隆日本血吸虫磷酸甘油酸激酶(SjPGK)编码基因片段,分析其核苷酸序列.方法根据曼氏血吸虫磷酸甘油酸激酶(SmPGK)cDNA 序列设计并合成一对引物,以日本血吸虫成虫总RNA为模板,采用逆转录-聚合酶链反应( RT-PCR )特异性扩增SjPGK基因片段,将其克隆入pMD18-T载体中,经双酶切分析和PCR鉴定,将阳性克隆进行脱氧核糖核酸序列测定;运用BLAST程序,将测序结果及其推导的编码氨基酸序列与NCBI数据库在核苷酸水平和氨基酸水平进行同源性比较.结果 RT-PCR特异性扩增出一条长约830 bp的条带;重组质粒的双酶切和以其脱氧核糖核酸为模板的PCR均可见一条与RT-PCR产物相同的条带;脱氧核糖核酸序列测定和分析结果表明:SjPGK基因片段长为 830 bp ,与 SmPGK 的核苷酸同源性为 85%,分值为672;氨基酸同源性为94%,分值为473.结论成功地克隆了SjPGK 编码基因片段,为寻找日本血吸虫新的抗感染疫苗候选分子奠定基础.

关键词：日本血吸虫、磷酸甘油酸激酶、基因、克隆、序列分析

所属期刊栏目：16

分类号：R383.24(医学寄生虫学)

资助基金：湖南省教育厅科研项目4-02-jy-02c391

在线出版日期：2004-09-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：257-260