动力蛋白重链对帕金森病模型细胞α-突触核蛋白自噬性降解的调控机制

摘要：

目的:探讨干扰或过表达动力蛋白重链(dynein heavy chain，Dynhc)基因后，帕金森病(Parkinson disease，PD)模型细胞中α-突触核蛋白的自噬溶酶体途径( autophagy-lysosome pathway，ALP)降解机制。方法:按实验要求将SH-SY5Y细胞分为对照组、PD组、Dynhc干扰组、Dynhc过表达组、Dynhc干扰+雷帕霉素组。用Western blot检测细胞中Dynhc、α-突触核蛋白、微管相关蛋白1轻链3 ( microtubule-associated protein l light chain 3，LC3)、溶酶体相关膜蛋白2(lysosome-associated membrane protein 2，LAMP2)、微管蛋白、动力蛋白激活蛋白p150、驱动蛋白KIF5B的蛋白表达水平；流式细胞仪检测细胞调亡水平；免疫共聚焦镜观察微管蛋白结构以及LC3与LAMP的共定位情况。采用SPSS 23.0软件进行统计分析，多组间比较采用单因素方差分析，进一步两两比较采用LSD-
t检验。
结果:5组细胞α-突触核蛋白、自噬标记蛋白、微管及微管相关蛋白表达均差异有统计学意义(均
P<0.001)。PD组Dynhc、α-突触核蛋白、LC3、LAMP2、p150、KIF5B的蛋白表达水平均高于对照组(均
P<0.05)；Dynhc干扰组Dynhc、LAMP2、微管蛋白、p150的蛋白表达水平均低于PD组(均
P<0.05)，α-突触核蛋白、LC3、KIF5B的蛋白表达水平均高于PD组(均
P<0.05)；Dynhc过表达组α-突触核蛋白、LC3、KIF5B的蛋白表达水平均低于PD组(均
P<0.05)，Dynhc、LAMP2、p150的蛋白表达水平高于PD组(均
P<0.05)；Dynhc干扰+雷帕霉素组LC3的蛋白表达水平高于Dynhc干扰组(
P<0.05)，Dynhc、α-突触核蛋白、LAMP2、微管蛋白、p150、KIF5B的蛋白表达水平与Dynhc干扰组比较差异无统计学意义(均
P>0.05)。与对照组比，PD组细胞凋亡水平提高[(12.77±1.66)%，(7.64±1.45)%]，微管形态不变，自噬体与溶酶体融合较多；与PD组比，Dynhc干扰组细胞凋亡水平[(18.45±1.91)%]提高，微管形态稀疏，自噬体与溶酶体融合较少；与PD组比，Dynhc过表达组细胞凋亡水平[(9.95±1.56)%]降低，微管结构无明显改变，自噬体与溶酶体融合较多；与Dynhc干扰组比，Dynhc干扰+雷帕霉素组细胞凋亡水平[(19.05±2.46)%]、微管形态、自噬体与溶酶体融合无明显改变。
结论:Dynhc可以提高细胞自噬溶酶体途径降解功能，并通过增加α-突触核蛋白降解以及维持微管结构完整使细胞凋亡减少。

关键词：帕金森病、自噬溶酶体途径、α-突触核蛋白、动力蛋白、微管蛋白、驱动蛋白

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资助基金：南京医科大学科技发展基金NMUB20220205;淮安市第一人民医院青年创新人才项目QC202222;Nanjing Medical University Science and Technology Development FundNMUB20220205;Youth Innovation Talent Project of Huai'an First People's HospitalQC202222

在线出版日期：2024-01-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：871-878