核仁小分子RNA宿主基因5对星形胶质细胞缺氧/复氧损伤的作用

摘要：

目的:探讨核仁小分子RNA宿主基因5(small nucleolar RNA host gene，SNHG5)对缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation，H/R)诱导的星形胶质细胞损伤的影响。方法:(1)体外培养星形胶质细胞，采用先缺氧培养6 h，再复氧培养18 h的方法建立H/R细胞模型，Lipofectamine? 2000脂质体法进行细胞lncRNA SNHG5转染，RT-qPCR检测H/R细胞及转染后lncRNA SNHG5的表达情况。(2)星形胶质细胞分为正常对照组、模型组、转染对照组(转染pcDNA-NC至细胞后，再建H/R细胞模型)和转染组(转染pcDNA-lncRNA SNHG5至细胞后，再建H/R细胞模型)，观察过表达lncRNA SNHG5对星形胶质细胞的影响。(3)将转染lncRNA SNHG5并进行H/R干预的星形胶质细胞分为转染+溶媒组(0.1%的DMSO孵育)和转染+抑制剂组(20 μmol/L的LY294002孵育)，观察PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002对H/R星形胶质细胞的影响。(4)CCK-8检测细胞增殖，流式细胞术检测细胞凋亡，Western blot检测细胞中增殖蛋白(Cyclin D1、Cyclin E)、凋亡蛋白(Caspase-3、Bax)和p-PI3K、p-AKT的表达，ELISA检测细胞培养上清液中炎性因子IL-1β和TNF-α水平，比色法检测细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)水平及细胞中丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)水平。采用SPSS 22.0软件进行独立样本
t检验和单因素方差分析，进一步两两比较用LSD-
t检验。
结果:(1)RT-qPCR结果显示，经H/R干预后，星形胶质细胞中的lncRNA SNHG5水平较正常培养细胞低(
t＝33.28，
P<0.05)。(2)lncRNA SNHG5过表达实验：模型组细胞增殖活性低于正常对照组[CCK-8 OD值：(0.64±0.02)，(1.23±0.02)，
t＝62.58，
P<0.05]，模型组细胞增殖蛋白Cyclin D1、Cyclin E表达均低于正常对照组(
t＝33.54，32.20，均
P<0.05)；转染组细胞增殖活性高于转染对照组[CCK-8 OD值：(1.49±0.02)，(0.65±0.03)，
t＝69.89，
P<0.05]，转染组细胞增殖蛋白Cyclin D1、Cyclin E表达均高于转染对照组(
t＝24.96，28.46，均
P<0.05)。模型组细胞凋亡率高于对照组[流式细胞术结果：(25.33±1.13)%，(9.06±0.21)%，
t＝42.47，
P<0.05]，凋亡蛋白Caspase-3和Bax表达也高于对照组(
t＝57.41，41.60，均
P<0.05)；转染组细胞凋亡率低于转染对照组[(16.56±0.60)%，(25.89±1.18)%，
t＝21.14，
P<0.05]，凋亡蛋白Caspase-3和Bax表达也高于转染对照组(
t＝77.79，58.34，均
P<0.05)。模型组细胞中p-PI3K和p-AKT蛋白表达均低于对照组(
t＝56.35，33.94，均
P<0.05)，转染组细胞中p-PI3K和p-AKT蛋白表达均高于转染对照组(
t＝130.14，76.37，均
P<0.05)。ELISA结果显示，模型组IL-1β和TNF-α水平均高于对照组(
t＝58.04，30.63，均
P<0.05)，转染组IL-1β和TNF-α水平均低于转染对照组(
t＝33.63，39.01，均
P<0.05)。比色法结果显示，模型组LDH和MDA水平均高于对照组(
t＝65.51，41.85，均
P<0.05)，SOD水平低于对照组(
t＝48.82，
P<0.05)；转染组LDH和MDA水平均低于转染对照组(
t＝37.93，30.72，均
P<0.05)，SOD水平高于转染对照组(
t＝30.32，
P<0.05)。(3)PI3K/Akt信号通路抑制实验：转染+抑制剂组的细胞增殖活性低于转染+溶媒组[CCK-8 OD值：(0.97±0.02)，(1.46±0.03)，
t＝15.24，
P<0.05]，相关的增殖蛋白Cyclin D1、Cyclin E也低(
t＝11.41，13.15，均
P<0.05)。转染+抑制剂组细胞凋亡率高于转染+溶媒组[流式细胞术：(26.11±0.86)%，(16.06±0.44)%，
t＝10.45，
P<0.05]，相关的凋亡蛋白Caspase-3、Bax也高(
t＝19.06，13.54，均
P<0.05)。转染+抑制剂组p-PI3K、p-AKT蛋白表达水平均低于转染+溶媒组(
t＝36.67，27.34，均
P<0.05)。ELISA结果显示，转染+抑制剂组IL-1β、TNF-α水平均高于转染+溶媒组(
t＝15.17，9.44，均
P<0.05)。比色法结果显示，转染+抑制剂组LDH和MDA水平均高于于转染+溶媒组(
t＝15.33，9.05，均
P<0.05)，SOD水平则低于转染+溶媒组(
t＝11.04，
P<0.05)。
结论:过表达lncRNA SNHG5促进了缺氧/复氧诱导的星形胶质细胞增殖，并抑制了细胞凋亡、炎性反应和氧化应激。

关键词：核仁小分子RNA宿主基因5、长链非编码RNA、星形胶质细胞、缺氧/复氧、增殖、凋亡

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资助基金：河南省医学科技攻关计划省部共建项目SB201901063;Henan Province Medical Science and Technology Research Program Provincial Co-construction ProjectSB201901063

在线出版日期：2023-05-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：1069-1076