10.19556/j.0258-7033.20220426-08
奶牛生物钟基因BMAL1真核表达载体的构建及生物信息学分析
本研究旨在克隆奶牛脑肌类芳香烃受体核转位蛋白1基因(Brain and Muscle Arnt-Like Protein 1,BMAL1)的蛋白编码序列(Coding Sequence,CDS)并构建其真核表达载体,运用生物信息学方法解析其CDS序列和编码蛋白特性.以牛肝脏组织为材料,利用PCR技术扩增奶牛BMAL1基因中带有同源臂的CDS片段.采用同源重组法,将目的片段连接至酶切线性化的pcDNA3.1-Puro-N-3HA真核表达载体上,酶切及测序结果均符合预期的质粒命名为pcDNA3.1-3HA-cBMAL1.将空载与重组质粒分别转染至HEK293T细胞,通过实时荧光定量PCR技术(qPCR)和Western Blotting技术检验奶牛BMAL1基因的过表达效果,并利用生物信息学软件分析BMAL1基因CDS区及其编码蛋白的特性和功能.结果显示,pcDNA3.1-3HA-cBMAL1真核表达载体构建成功,将该质粒转染至HEK293T细胞后,成功实现了BMAL1在mRNA和蛋白水平的过表达;牛BAML1基因与绵羊、山羊同源性最高,BMAL1蛋白为不稳定蛋白,其上不存在信号肽以及跨膜结构,共包含72个磷酸化位点,其二级结构以无规则卷曲和α-螺旋为主,参与生物钟基因节律性表达调控等过程.本研究构建了奶牛BMAL1基因的真核表达载体,在HEK293T细胞中成功过表达,并进行了系统的生物信息学分析,为进一步探究奶牛BMAL1基因的功能和奶牛生物钟系统的分子调控机制奠定基础.
奶牛、BMAL1、生物钟、载体构建、生物信息学
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S823.2(家畜)
国家自然科学基金;中国博士后科学基金;西北农林科技大学大学生创新创业训练计划校重点项目;国家卫生健康委员会时间生物学重点实验室四川大学开放基金项目
2023-04-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共7页
161-167
