10.19556/j.0258-7033.20220420-09
BMP15通过bta-miR-2285bc-BMPR2调控牛卵泡颗粒细胞功能的研究
本实验旨在探究牛卵泡颗粒细胞(Granulosa Cells,GCs)bta-miR-2285bc与BMPR2的靶标关系,及其作为BMP15下游关键因子对GCs增殖和卵泡发育的潜在调控作用.利用miRanda预测bta-miR-2285bc与BMPR23'UTR的结合位点,构建BMPR23'UTR野生型与突变型双荧光报告载体,并通过双荧光素酶报告试验验证其靶标关系;屠宰场获取牛卵巢并于实验室分离直径4～8 mm卵泡,刮取卵泡壁GCs进行体外培养.设置浓度梯度,根据BMPR2表达量确定BMP15最适添加浓度.转染bta-miR-2285bc mimics/inhibitor至GCs并添加BMP15,qRT-PCR和Western blotting分别检测BMPR2 mRNA和蛋白表达,随后qRT-PCR检测GCs BMP/Smad信号通路、增殖、凋亡和类固醇激素合成相关基因表达水平,Elisa检测细胞培养液中雌激素(E2)和孕激素(P4)浓度.结果显示:bta-miR-2285bc能够靶向结合BMPR23'UTR;向体外培养的GCs添加最适浓度BMP15(100 ng/mL)并转染bta-miR-2285bc mimics时,BMP/Smad信号通路相关基因Smad1、Smad5、Smad9和Smad4表达量下降(P<0.05);细胞增殖相关基因CCND2表达量下降(P<0.05);细胞凋亡相关基因BAX和Caspase3表达量上升(P<0.05);抑凋亡基因BCL2表达量下降(P<0.01);类固醇激素合成相关基因CYP11A1、CYP19A1、HSD3B1和STAR表达量下降(P<0.05);GCs培养液中E2和P4浓度下调(P<0.05).转染bta-miR-2285bc inhibitor得到与上述相反的实验结果.综上,BMP15通过bta-miR-2285bc-BMPR2调控牛卵泡GCs BMP/Smad信号通路、细胞增殖、细胞凋亡和类固醇激素合成相关基因的表达,调控类固醇激素的合成,进而可能影响GCs增殖和卵泡发育.
牛、卵泡颗粒细胞、BMPR2、bta-miR-2285bc、类固醇激素
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S823.2(家畜)
青年三晋学者专项;山西省基础研究计划项目;大同市重点研发计划项目;工程重点学科建设专项
2023-03-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共9页
203-211
