10.19556/j.0258-7033.20211102-11
绵羊NDRG1基因表达和干扰载体的构建及验证
为研究NDRG1基因在绵羊生长繁殖中的功能,本实验通过克隆NDRG1基因编码区并分别构建过表达和干扰载体,在细胞水平对其功能进行验证.利用RT-PCR扩增绵羊NDRG1基因CDs区,将其克隆至pcDNA3.1(+)载体构建重组表达载体,设计并构建针对NDRG1 CDs区干扰载体,利用内切酶消化法对相关质粒进行鉴定.将构建成功的重组载体转染到HEK293T细胞中,分别利用RT-qPCR和Western Blot方法检测其mRNA和蛋白表达量,确认载体功能.结果显示,NDRG1基因克隆片段为1 378 bp,与已发布预测的绵羊NDRG1基因进行比对显示在第1 031核苷酸位点发生了G-A突变,氨基酸比对结果显示其同源性为100%.酶切鉴定结果显示,NDRG1表达载体和干扰载体构建成功.RT-qPCR与Western Blot结果表明,构建的重组载体可介导NDRG1基因在HEK 293T细胞中极显著增高,构建的干扰载体可显著降低NDRG1基因表达水平,其中NDRG1-shRNA3干扰效果极显著且高达90%.本实验成功克隆绵羊NDRG1基因,构建针对该基因的表达载体和干扰载体,并在细胞水平验证其功能,为深入研究NDRG1基因在绵羊细胞中的功能提供基础.
NDRG1基因、表达载体、干扰载体、绵羊
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S826.2(家畜)
国家自然科学基金;国家重点实验室开放基金;动物疾病防控兵团重点实验室开发课题
2022-11-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共7页
200-206
