无PAM限制的CRISPR/Cas9系统构建及效率验证

摘要：

CRISPR/Cas9系统在进行靶向基因敲除、转录激活以及抑制时,需要通过识别Cas9靶位点上的一个原间隔子相邻基序(PAM)序列进行特异性靶向基因编辑.现阶段,被广泛认可的化脓性链球菌SpCas9仅识别比较短的PAM为NGG(N为任意碱基,G为鸟嘌呤).本实验在野生型SpCas9、PAM为NG的xCas9和SpCas9-NG的基础上,构建预期PAM为NNG的突变体SpCas9NNG、预期PAM为NNN的突变体xCas9NNN和ngCas9NNN,通过双荧光素酶报告基因检测评价其切割活性.结果 显示:本次实验构建的ngCas9NNN突变体对PAM为NNN的靶标DNA具有显著的切割活性,为后续拓宽CRISPR/Cas9系统的靶向范围提供重要参考.

关键词：CRISPR/Cas9、无PAM限制、突变体、基因编辑

所属期刊栏目：57

分类号：S813.3(普通畜牧学)

资助基金：国家自然科学基金;国家自然科学基金;青岛市民生科技计划;青岛市民生科技计划;山东省草学一流学科建设经费

在线出版日期：2021-06-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：189-194,199