从江香猪源干扰素γ植物表达载体构建及在生菜中瞬时表达

摘要：

为构建从江香猪源干扰素γ(IFNγ)植物表达载体,通过农杆菌真空渗透法在新鲜生菜中实现瞬时表达.参考GenBank登录的猪IFNγ 基因序列设计1对特异性IFNγ 引物,采用RT-PCR方法从贵州从江香猪源肝脏组织扩增IFNγ 基因序列,将其克隆至植物表达载体PBI121,转化根癌农杆菌LBA4404,筛选阳性菌株提取质粒,对重组质粒进行PCR扩增、双酶切及测序鉴定;携带重组质粒根癌农杆菌真空渗透法感染生菜,GUS染色检测感染的生菜叶片,ELISA检测感染生菜叶片中从江香猪源IFNγ 蛋白,分析重组质粒在生菜中表达效果;采用细胞病变抑制实验检测生菜中从江香猪源IFNγ 蛋白抗病毒活性.结果表明:本研究成功地从贵州从江香猪源肝脏组织扩增获得IFNγ 基因序列并构建了从江香猪源IFNγ 植物表达载体PBI121-IFNγ;GUS染色感染的生菜叶片可见蓝色物质;ELISA检测感染生菜叶片中从江香猪源IFNγ 蛋白含量为169.397、170.657、170.37 pg/mL;生菜中表达从江香猪源IFNγ 经4-6稀释在Marc145细胞上仍能够抑制100 TCID50的PRRSV的致细胞病变作用.本实验成功构建从江香猪源IFNγ 植物表达载体PBI121-IFNγ,生菜中瞬时表达蛋白具有免疫反应性和抗病毒活性,为从江香猪源IFNγ 药用植物蛋白的研究开发提供参考依据.

关键词：从江香猪源干扰素γ、植物表达载体、生菜、瞬时表达、抗病毒活性

所属期刊栏目：55

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金31460668;贵州省科学技术基金黔科合 J 字 [2015]2046 号;贵州省高层次创新型人才培养黔财教 [2017] 号;贵州大学博士基金贵大人基合字201312 号;贵州省研究生工作站计划项目[GZZ2017002];贵州省科技平台及人才团队计划黔科合平台人才 [2018]5253

在线出版日期：2019-07-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：96-100