高分辨率溶解曲线分析结合COLD-PCR快速检测绵羊低丰度FecB基因

摘要：

本文利用高分辨率熔解曲线分析结合COLD-PCR建立绵羊骨形态发生蛋白受体IB(BMPR-IB)基因低丰度A746G点突变的检测方法,为FecB基因大面积高通量筛查提供方便快捷和低成本的检测技术.实验分别提取绵羊BMPR-IB基因A746G点突变阳性纯合子和阴性纯合子的基因组,分别PCR扩增223 bp的目的片段,测定浓度和纯度后,分别稀释至0.05 rg/μL,将阳性纯合子用阴性纯合子进行系列稀释作为模板标准品.根据模板标准品序列设计合成3对引物,以标准品为模板进行COLD-PCR,其产物进行高分辨率熔解曲线分析,生成的归一化温度转移差异图(Normlized and Temp-Shifted Differines Plot)即为标准曲线图,作为待测样品FecB检测的依据,对其可靠重复性做了进一步验证.结果表明:2对引物COLD-PCR HRM标准曲线图曲线分离清晰可靠,检测下限均为0.5％,与传统qPCR HRM相比,灵敏度提高到4倍.本实验建立的绵羊低丰度FecB基因检测方法可以用于绵羊FecB基因大面积高通量快速筛查工作.

关键词：绵羊、FecB基因、COLD-PCR、高分辨率熔解曲线分析

所属期刊栏目：53

分类号：S826.2(家畜)

在线出版日期：2017-07-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：122-126,131