启动子和PolyA序列对水牛乳腺特异性表达载体表达效率的影响

摘要：

为了获得能有效表达促乳素的乳腺特异性表达载体,本研究系统比较了不同长度的启动子和有/无PolyA序列对乳腺特异性表达载体表达标记基因绿色荧光蛋白(GFP)和目的基因促乳素(PRL)的影响.将不同载体瞬时转染Bcap37细胞后,分别用实时定量PCR和流式细胞仪检测PRL和GFP的表达水平.结果表明:长度为5.2 kb的β-酪蛋白(Beta casein,BCN)启动子启动PRL的表达量显著高于长度为3.8 kb启动子,前者的表达量约为后者的6倍;在BCN启动子长度均为5.2 kb情况下,添加PolyA的载体p5.2BCN-PRL-PolyA-CMV-GFP-Neo组PRL的相对表达量为8.17,p5.2BCN-PRL-PolyA-CMV-GFP组PRL的相对表达量为17.84,均显著高于p5.2BCN-PRL-CMV-GFP-Neo组,可见添加PolyA后,PRL的表达量均显著增加;进一步比较发现,含PolyA的载体中GFP的表达水平也显著高于不合PolyA的载体.对比以上结果发现,添加PolyA能够有效解除启动子之间的转录干扰,使标记基因的启动子CMV和目的基因的启动子BCN均能顺利启动基因表达.经过优化的载体启动目的基因PRL表达的效率更高,可应用于下一步的研究工作中.

关键词：启动子、PolyA序列、促乳素、绿色荧光蛋白、基因表达、水牛

所属期刊栏目：51

分类号：S823.2(家畜)

资助基金：国家“863”重大专项2011AA100607;广西亚热带生物资源保护利用重点实验室开放课题SB1002

在线出版日期：2015-06-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：62-67