鸡胚胎干细胞无饲养层培养体系的建立及其转染体系的优化

摘要：

鸡胚胎干细胞(cES)以其全能性,在研究胚胎发育生物学和家禽育种等方面有巨大的应用前景.本实验旨在建立cES无饲养层培养体系和对LipofactiminTM LTX(脂质体)介导转染体系进行优化.采用药匙法从新鲜受精蛋中分离获取cES,接种于层粘连蛋白包被的培养皿,待形成大克隆后,用口吸管剥离法吸取cES克隆进行消化传代,并采用生化和免疫学方法鉴定其干细胞活性.设计质粒量800、900、1 000ng 3个水平,质粒、脂质体比为1∶1.5、1∶2、1∶2.5体系转染cES.结果表明:无饲养层培养体系体外培养cES细胞能稳定传代至第6代,鉴定结果显示碱性磷酸酶阳性和阶段特异性胚胎抗原1阳性,指明克隆能保持未分化状态;质粒900 ng、质脂比为1∶2时,可获得最佳转染效率72％,为cES的脂质体介导外源基因的转染提供参考.

关键词：胚胎干细胞、无饲养层培养体系、脂质体、优化转染、鸡

所属期刊栏目：49

分类号：S831.3(家禽)

资助基金：国家自然科学基金;高等学校博士学科点专项科研基金;江苏省"六大人才高峰"高层次人才项目

在线出版日期：2014-05-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：22-26