大麻素Ⅰ型受体基因（CNR1）特异性siRNA表达载体的构建及稳定干扰阳性L6细胞克隆的筛选
大麻素Ⅰ型受体（CNR1）是介导内源性大麻素发挥作用的关键分子，在食欲和能量代谢调控中发挥着重要作用。为了更深入研究CNR1的基因功能，本实验旨在构建和筛选有效沉默CNR1基因的干扰表达载体，并筛选出稳定转染干扰质粒的阳性细胞系。设计合成3对CNR1基因的特异性发夹小干扰RNA（siRNA）干扰引物，将其连接入干扰载体pYr-1.1，构建可沉默CNR1基因的siRNA表达载体CNR1-1、CNR1-2和CNR1-3。并采用LipofectamineTM（Lip）2000介导质粒转染L6细胞，绿色荧光蛋白的表达和流式细胞仪监测转染效率，通过实时荧光定量分析siRNA表达载体的干扰效果。并进一步用G418进行了稳定转染细胞筛选。结果显示，CNR1基因的siRNA表达载体构建正确，瞬时转染L6细胞的转染效率分别为10.45%（P<0.01）、8.57%（P<0.01）和8.71%（P<0.01）；干扰效率为39%（P<0.05）、64%（P<0.01）及68%（P<0.01）。稳定筛选的最佳G418浓度为800μg/mL，稳定筛选后干扰效率分别为43%（P<0.05）、78%（P<0.01）及91%（P<0.01）。干扰效率较高的CNR1-3表达载体和稳定转染CNR1-3的细胞系为构建筛选成功的siRNA表达载体和阳性细胞系。本研究提供了一种有效沉默CNR1基因表达的方法，同时稳定沉默的阳性L6细胞系成功筛选为进一步研究大麻素Ⅰ型受体的基因功能提供了基础资料。
sirna表达载体、表达载体的构建、稳定干扰、特异性、细胞克隆、大麻素、受体基因、型受体
R737.33;R394;Q785
2014-03-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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