猪圆环病毒Ⅱ型感染3D4/2细胞的转录组学分析

摘要：

[目的]通过转录组测序筛选猪圆环病毒Ⅱ型(Porcine circovirus type Ⅱ,PCV2)感染猪肺泡巨噬细胞系(3D4/2)差异表达基因,为了解PCV2感染宿主免疫细胞机制和抗PCV2感染药物研发奠定基础.[方法]用感染复数(multiplicity of infection,MOI)为 1 的 PCV2 NJ2002 株处理 3D4/2 细胞,利用 Illumina NovaSeq 6000 测序平台进行转录组测序.使用DeSeq 2.0软件进行差异表达基因分析,并对差异表达基因进行基因本体论(GO)、京都基因与基因组百科全书(KEGG)功能分析及转录因子靶向分析,选取免疫及凋亡相关基因进行实时荧光定量PCR验证,用Western blotting技术检测细胞内磷脂酰肌醇激酶(PI3K)及磷酸化胞内磷脂酰肌醇激酶(p-PI3K)、蛋白激酶B(Akt)和磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)蛋白表达水平.[结果]转录组测序结果显示,与对照组相比,PCV2感染组共获得713个差异表达基因,其中313个上调,400个下调.GO功能和KEGG通路富集分析显示,差异表达基因与免疫应答等相关,主要富集在细胞外基质受体互作通路、新陈代谢通路、HIF-1信号通路、病毒致癌作用、PI3K-Akt等信号通路.实时荧光定量PCR结果与转录组测序的基因表达水平保持一致.Western blotting检测结果显示,PCV2感染3D4/2细胞24 h后PI3K和Akt蛋白磷酸化水平显著升高(P＜0.05).转录因子靶向分析表明,差异表达基因与核转录因子Y亚基β(NFYB)和ETS转录因子(ELK4)联系紧密.[结论]PCV2可能通过PI3K-Akt信号通路影响下游炎症信号通路和凋亡信号通路增强自身复制能力.NFYB和ELK4转录因子在PCV2感染过程中可能发挥重要作用,可考虑作为抗PCV2药物靶点.研究结果为深入了解PCV2感染宿主免疫细胞机制和相关药物开发提供了理论基础.

关键词：猪圆环病毒Ⅱ型、3D4/2细胞、转录组测序、差异表达基因、转录因子

所属期刊栏目：51

分类号：S852.3(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金;广西大学大学生创新创业训练计划项目

在线出版日期：2024-02-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：42-51