猪A3Z2基因生物信息学分析及其对PEDV复制的抑制作用

摘要：

[目的]对猪源载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽蛋白3(apolipoprotein B mRNA-editing enzyme catalytic polypeptide protein 3,APOBEC3,简称A3)家族的A3Z2基因进行克隆、生物信息学分析,筛选稳定表达A3Z2的IPEC-J2细胞,研究A3Z2对猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)增殖的影响,以期为研究A3Z2的抗病毒功能奠定基础.[方法]以IPEC-J2细胞总RNA为模板,采用RT-PCR法扩增猪A3Z2基因CDS区,并对其进行遗传进化和生物信息学分析.构建pcDNA3.1-3× Flag-A3Z2载体,将其转染IPEC-J2细胞后经G418筛选、有限稀释法和单克隆细胞培养,获得稳定表达A3Z2的细胞株.分别采用间接免疫荧光试验和Western blotting方法鉴定A3Z2的表达,采用实时荧光定量PCR和Western blotting方法分析PEDV N基因的mRNA和蛋白表达水平.[结果]猪A3Z2基因CDS区长843 bp,编码280个氨基酸,分子质量约为32.7 ku,不存在跨膜区及信号肽切割位点,主要存在于细胞核中.A3Z2蛋白二级结构由α-螺旋(27.14％)、延伸链(17.86％)、β-转角(6.43％)和无规则卷曲(48.75％)构成.通过细胞筛选获得稳定表达A3Z2的细胞株IPEC-J2-A3Z2;间接免疫荧光方法和Western blotting结果显示,A3Z2能在IPEC-J2细胞中表达.实时荧光定量PCR和Western blotting结果显示,细胞株IPEC-J2-A3Z2中PEDV N基因的mRNA和蛋白表达均被A3Z2抑制.[结论]本研究成功克隆了猪A3Z2基因,筛选获得了 IPEC-J2-A3Z2细胞株,证实了 A3Z2抑制PEDV复制的作用,为研究PEDV与A3Z2相互作用的分子机制和以此为靶点筛选抗PEDV新药提供了思路.

关键词：猪、A3Z2基因、生物信息学、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、IPEC-J2细胞

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分类号：S852.65+1(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家重点研发计划;十四五广东省农业科技创新十大主攻方向揭榜挂帅项目;广东省基础与应用基础研究基金;广东省基础与应用基础研究基金;茂名实验室自主科研项目;广州市基础研究计划;广东省农业科学院杰出人才项目;国家自然科学基金

在线出版日期：2023-09-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共12页

页码：3695-3706