蒲公英甾醇对AFB1所致鸡原代肝细胞氧化损伤的保护作用

摘要：

[目的]探讨蒲公英甾醇对黄曲霉毒素B1(AFB1)诱导的鸡原代肝细胞氧化损伤的保护作用及机制,为应用蒲公英甾醇防治AFB1中毒提供理论依据.[方法]采用组织块酶消化法分离鸡原代肝细胞并进行PAS糖原染色鉴定,通过CCK-8法绘制肝细胞生长曲线;通过MTT法测定AFB1对鸡肝细胞的毒性,结合测定肝细胞上清液中谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)水平,以确定AFB1的体外建模浓度.通过MTT法确定蒲公英甾醇的安全给药浓度后,将试验分为6组:空白对照组、模型组、蒲公英甾醇剂量组(高、中、低剂量组)、阳性对照组.建立AFB1诱导的鸡原代肝细胞损伤模型并给予药物,通过试剂盒测定细胞内活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)以及还原型谷胱甘肽(GSH)水平.通过实时荧光定量PCR法测定Keap1/Nrf2信号通路关键基因血红素加氧酶-1(HO-1)、NADPH醌氧化还原酶1(NQO1)、Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)和核转录因子E2相关因子2(Nrf2)表达量.[结果]试验成功分离鉴定鸡原代肝细胞,在培养24～72 h细胞活力较高;确定0.05 μg/mL作为AFB1体外诱导鸡原代肝细胞损伤的建模浓度;确定20、10、5 μg/mL作为蒲公英甾醇高、中、低剂量组的给药浓度;与模型组相比,蒲公英甾醇可极显著降低AFB1所致鸡原代肝细胞氧化应激相关指标ROS和MDA含量(P＜0.01),极显著提高抗氧化物SOD活性(P＜0.01);极显著或显著提高AFB1所致鸡原代肝细胞中HO-1、NQO1和Nrf2基因(除低剂量组外)表达量(P＜0.01;P＜0.05),降低Keap1基因表达量.[结论]蒲公英甾醇通过调控鸡原代肝细胞Keap1/Nrf2信号通路提高其抗氧化能力,从而对AFB1诱导的鸡原代肝细胞氧化损伤起到保护作用.

关键词：黄曲霉毒素B1(AFB1)、蒲公英甾醇、鸡原代肝细胞、氧化应激、保护作用

所属期刊栏目：50

分类号：S852.4+4(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金;吉林省科技发展计划项目;吉林省创新创业人才资助项目

在线出版日期：2023-09-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：3541-3549