梓醇抑制Galectin-3和CD146互作改善AGEs致肝窦内皮细胞的损伤作用

摘要：

[目的]探讨梓醇通过影响半乳糖凝集素-3(Galectin-3)和CD146的相互作用改善晚期糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)导致大鼠肝窦内皮细胞(rat liver sinusoidal endothelial cells,RLSECs)的炎性损伤作用.[方法]用不同浓度(0、0.1、1、10μmol/L)梓醇分别孵育RLSECs 48 h后,采用CCK-8法观察细胞增殖情况.用10μmol/L梓醇孵育RLSECs0、12、24、48、96 h,同上法观察细胞增殖情况.设Control(空白对照组)、AGEs(AGEs 处理)、Cat1(1 μmol/L 梓醇)、Cat10(10 μmol/L 梓醇)和阳性对照 GB1107 组(1 μmol/L GB1107),Cat1、Cat10和GB1107组加入相应含量的药物培养基孵育30 min后,除Control组外其他组均在培养基中加入终浓度为200 μg/mL的AGEs刺激,观察以上各组的RLSECs形态变化,采用乳酸脱氢酶(lactate hydrogenase,LDH)法检测细胞的损伤程度,采用ELISA法观察各组单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的分泌量.将巨噬细胞RAW264.7种板,同上法分组并给药,48 h后采用Griess法观察各组一氧化氮(nitric oxide,NO)向细胞上清液的释放量.将RAW264.7细胞种于Transwell小室,RLSECs种于孔板底部,设Control、AGEs、Cat10、Cat10+LV-Galectin-3-GFP、Cat10+LV-Galectin-3-shRNA 组,后两组先转染慢病毒 48 h,再分别给药30 min后,除Control组外在培养基中加入终浓度为200μg/mL的AGEs刺激,48 h后用结晶紫法观察巨噬细胞的透膜细胞数量.将Control、AGEs、Cat10、GB1107组的RLSECs孵育药物48 h后,采用免疫荧光法观察Galectin-3和CD146的共定位情况.将Control、AGEs和Cat10组的蛋白样品通过Western blotting和免疫共沉淀(Co-IP)法检测Galectin-3和CD146的相互作用以及各自的表达量.[结果]与Control组相比,Cat0.1组RLSECs增殖率无显著差异(P＞0.05),Cat1和Cat10组RLSECs增殖率显著升高(P＜0.05);与孵育0 h组相比,10 μmol/L梓醇孵育48 h组RLSECs增殖率显著上升(P＜0.05).因此,后续试验选用10 μmol/L梓醇孵育48 h为最适试验条件.与AGEs组相比,Cat1和Cat10组改善AGEs导致的细胞损伤,RLSECs上清液LDH活力及MCP-1、ICAM-1的释放量显著降低(P＜0.05).与AGEs组相比,梓醇组抑制巨噬细胞RAW264.7的激活作用,细胞NO的释放量显著降低(P＜0.05).通过慢病毒载体过表达和敲低RLSECs和RAW264.7的Galectin-3,证明了梓醇通过抑制该分子表达可显著改善巨噬细胞的浸润作用(P＜0.05).与AGEs组相比,Cat10组Galectin-3与CD146的结合被显著抑制(P＜0.05),且不影响两种分子的各自表达量(P＞0.05).[结论]梓醇通过促进AGEs致Galectin-3和CD146分子复合物的解偶联作用,改善AGEs致肝窦血管内皮细胞的损伤以及促炎因子的释放,降低巨噬细胞的激活和NO的分泌,发挥肝窦血管内皮的保护作用,通过离体试验初步证明了其发挥改善糖尿病AGEs沉积造成的肝损伤的作用机制.

关键词：梓醇、糖尿病肝损伤、晚期糖基化终末产物(AGEs)、Galectin-3、CD146、炎性损伤

所属期刊栏目：50

分类号：S852;R285.5(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金;江苏省高校自然科学基金面上项目;江苏农牧科技职业学院科研项目

在线出版日期：2023-08-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共12页

页码：2820-2831