猪RegⅢy蛋白的重组表达及功能研究

摘要：

[目的]探究重组猪RegⅢγ蛋白的生物功能及相应分子机理,为该蛋白的开发应用提供参考.[方法]利用PCR扩增RegⅢγ基因片段,并连接至pDCP载体,以构建RegⅢγ蛋白重组表达系统.加入IPTG低温诱导促使重组蛋白高效表达,利用镍柱亲和层析纯化蛋白并进行透析后研究其对不同细菌的抑制作用,以及对猪小肠上皮细胞(IPEC-J2细胞)的促增殖与损伤修复及抗氧化与凋亡的功能,进一步探究其分子机理.[结果]纯化后重组蛋白Western blotting鉴定结果显示,17 ku处存在特征条带,确定重组猪RegⅢγ蛋白成功表达.重组猪RegⅢγ蛋白对金黄色葡萄球菌和化脓性链球菌2种革兰阳性菌有明显的抑菌效果,MIC90均为39.1 μg/mL,对大肠杆菌和肠炎沙门氏菌2种革兰阴性菌未产生抑菌圈;可促进IPEC-J2细胞的增殖及损伤修复,且浓度为10 μg/mL时增殖与修复效果最佳.与对照组相比,表皮生长因子受体(EGFR)、细胞外调节蛋白激酶1(ERK1)、ERK2、细胞周期蛋白依赖激酶2(CDK2)、CDK4、细胞周期蛋白E(Cyclin E)和CyclinD基因mRNA表达水平显著升高(P＜0.05),而丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1(AKT1)基因mRNA表达水平显著降低(P＜0.05).将重组蛋白作用于氧化损伤IPEC-J2细胞时,与对照组相比,超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性极显著增强(P＜0.01),丙二醛(MDA)含量(P＜0.05)、乳酸脱氢酶(LDH)(P＜0.01)活性均降低,并发现其通过降低促凋亡基因Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9及Bax基因的mRNA表达水平,提高抗凋亡基因Bcl-2的mRNA表达水平,发挥对氧化损伤IPEC-J2细胞的抗氧化与凋亡作用.[结论]重组猪RegⅢ γ蛋白对革兰阳性菌有选择性抑制作用,对IPEC-J2细胞增殖与损伤修复均有促进作用,且具有一定抗氧化与凋亡作用.

关键词：RegⅢγ、原核表达、抗菌、细胞增殖、损伤修复、抗氧化与凋亡

所属期刊栏目：50

分类号：S828(家畜)

资助基金：湖南省教育厅项目18A109

在线出版日期：2023-07-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共13页

页码：2414-2426