1株环境源单增李斯特菌的分离鉴定及生物特性分析

摘要：

[目的]探究牦牛屠宰场中存在的单增李斯特菌对牦牛肉造成污染的风险.[方法]通过细菌分离培养、形态观察、生化试验及分子学方法对牦牛屠宰场50份污水样品中的单增李斯特菌进行分离鉴定;通过PCR方法对分离株血清型和毒力基因进行鉴定和检测,并测定分离株在不同生长条件下D600 nm值;通过细胞的黏附和侵袭试验及小鼠半数致死量(LD5o)确定分离株的毒力.[结果]从50份污水样品中分离出1株革兰氏阳性短杆状细菌.分离株在李斯特菌显色培养基上为蓝绿色菌落,镜检为革兰氏阳性两端钝圆的短杆状菌,疑似为单增李斯特菌.生化试验结果显示,分离株可水解七叶苷,发酵葡萄糖、麦芽糖和鼠李糖,MR、VP、动力、过氧化氢酶试验为阳性,甘露醇和木糖发酵试验为阴性.系统进化树显示,分离株与单增李斯特菌EDG-e具有高度同源性,序列相似性为99％,血清型鉴定其血清型为1/2a.毒力基因检测结果显示,分离株携带inlB、inlC、inlJ、actA、plcA、prfA、mpl、hly、inlA、SigmnaB毒力基因.抗应激能力试验显示,分离株在低温、强酸、强碱、高盐、乙醇胁迫和氧化等极端环境中的生长速度极显著高于标准株ATCC 19111(P＜0.01).细胞试验显示,分离株对RAW246.7细胞的黏附率为8.3％,侵袭率为2.5％,其黏附和侵袭能力均极显著高于标准株ATCC 19111(P＜0.01).对Caco-2细胞的黏附率为6.2％,侵袭率为1.5％,黏附和侵袭能力均极显著高于标准株ATCC 19111(P＜0.01).动物试验结果显示,分离株对小鼠的LD50为1047 CFU.[结论]本研究获得的单增李斯特菌分离株血清型为1/2a,为引起人类李氏杆菌病的主要血清型,其抗应激能力较强,属于强毒株.本研究为牧区单增李斯特菌的监测提供了分子生物学基础,同时为保障牦牛肉食品安全提供理论依据.

关键词：单增李斯特菌、牦牛、分离鉴定、生物特性

所属期刊栏目：50

分类号：S852.61(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金;国家自然科学基金;国家自然科学基金;国家重点研发计划

在线出版日期：2023-05-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共13页

页码：1543-1555