鸡IFIT5对J亚群禽白血病病毒在DF-1细胞内复制的影响

摘要：

[目的]制备鸡干扰素诱导蛋白含三角形四肽重复5(1FIT5)多克隆抗体,以探究IFIT5对J型禽白血病病毒(ALV-J)在鸡胚成纤维细胞(DF-1)内复制的影响.[方法]以感染ALV-J的鸡脾脏组织细胞提取的RNA反转录获得的cDNA作为模板,对IFIT5基因进行PCR扩增,利用重组酶将纯化后的PCR产物和线性化载体进行连接,构建重组质粒pET-28a-IFIT5和pcDNA5-flag-IFIT5并测序.将测序正确的重组质粒pET-28a-IFIT5转化大肠杆菌BL21感受态细胞进行诱导表达,表达的融合蛋白His-IFIT5纯化后免疫6周龄BALB/c雌鼠制备多克隆抗体,通过Western blotting鉴定抗体的特异性,利用间接ELISA测定抗体的效价.将测序正确的重组质粒pcDNA5-flag-IFIT5 转染 DF-1 细胞,24 h 后接种 ALV-J,通过 Western blotting 检测 DF-1 细胞中过表达 IFIT5 对ALV-J复制的影响.[结果]试验成功扩增到大小为1 440 bp的IFIT5基因,并成功构建重组质粒pET-28a-IFIT5和 pcDNA5-flag-IFIT5.pET-28a-IFIT5 可以表达约 56 ku 的可溶性蛋白 His-IFIT5,Western blotting 结果显示,制备的鼠抗IFIT5蛋白多克隆抗体能特异性识别DF-1细胞中过表达的IFIT5蛋白,效价为1 ∶32 000.pcDNA5-flag-IFIT5能在DF-1细胞中高效表达,且在DF-1细胞中过表达IFIT5可以促进ALV-J复制.[结论]本研究制备的鼠抗IFIT5蛋白多克隆抗体具有较高的反应性和特异性;在DF-1细胞中过表达IFIT5可以促进ALV-J复制.本试验结果为深入研究IFIT5蛋白的生物学功能提供参考.

关键词：IFIT5基因、J型禽白血病病毒(ALV-J)、原核表达、多克隆抗体

所属期刊栏目：50

分类号：S852.65+9.3(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金31972646

在线出版日期：2023-02-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：310-316