非洲猪瘟病毒p37蛋白生物信息学分析及其多克隆抗体制备

摘要：

[目的]获取ASFV p37蛋白,并制备抗ASFV p37蛋白的多克隆抗体,为ASFV p37蛋白结构和功能研究提供材料.[方法]应用生物信息学工具对ASFV HLJ/2018(GenBank登录号:MK333180.1)p37蛋白进行分析,设计合成p37基因,并构建pET32a-p37重组质粒.将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达后,通过SDS-PAGE对重组蛋白的可溶性进行分析.收集菌体进行超声破碎,分离沉淀并使用8 mol/L尿素变性后离心,用0.45μm滤膜过滤离心后的上清,使用镍亲和层析柱纯化蛋白,通过SDS-P AGE,Western blotting对其纯化效果及特异性进行验证.将纯化后的p37蛋白按照50μg/只免疫小鼠,制备抗ASFV p37蛋白多克隆抗体.利用间接ELISA方法测定制备的多克隆抗体效价;通过Western blotting、间接免疫荧光试验检测该多克隆抗体的特异性.[结果]生物信息学分析表明,p37蛋白为稳定亲水性蛋白,无跨膜区和信号肽.二级结构主要含有 螺旋(45.28％)、延伸链(15.09％)、无规则卷曲(31.54％).SDS-PAGE、Western blotting结果显示,经IPTG诱导后,成功表达重组蛋白p37,大小62 ku左右,主要以包涵体形式存在,且能与His单克隆抗体发生反应.间接ELISA结果显示,制备的鼠源多克隆抗体效价为1 ∶256 000.Western blotting结果显示,在42 ku左右出现了特异性条带;间接免疫荧光显示出了特异性的红色荧光,表明该多克隆抗体能与重组杆状病毒表达的p37蛋白发生反应,具有较好的特异性.[结论]本试验成功表达并纯化了 ASFV p37蛋白,制备了抗ASFV p37蛋白多克隆抗体,重组蛋白具有较好的免疫原性,能产生较强的免疫反应,为后续ASFV p37蛋白结构功能研究、抗体及相关疫苗研发奠定基础.

关键词：非洲猪瘟病毒(ASFV)、p37蛋白、蛋白表达、多克隆抗体

所属期刊栏目：50

分类号：S852.65+1(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金;河南省高校科技创新团队项目

在线出版日期：2023-02-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：300-309