传染性支气管炎病毒对鸡免疫反应及重组禽β-防御素11和12抗病毒作用的研究

摘要：

[目的]探究呼吸型传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)对蛋鸡免疫反应的影响及重组禽β-防御素(avian β-defensins,AvBDs)的抗病毒作用.[方法]试验将70只7日龄SPF白来航鸡随机分为2组,每组35只.攻毒组通过滴鼻点眼途径接种呼吸型IBV强毒(CK/CH/LSD/051),对照组以相同途径接种等剂量灭菌PBS.定时观察临床症状14 d并记录,在攻毒后12 h、36 h、3 d、7 d和14 d 2组各随机选取5只鸡心脏采血处死,检测血清抗体水平并收集部分气管和肾脏进行组织病理学检测.采集法氏囊、脾脏、肾脏和气管,提取RNA,运用实时荧光定量PCR方法检测组织中IBV的病毒载量、Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)及信号转导分子、AvBDs基因表达量变化.将重组AvBD11和AvBD12转染鸡胚肾细胞(chicken embryo kidney,CEK)并在病毒感染细胞后6、12、24、36和48 h收取细胞上清和细胞用于提取RNA,通过实时荧光定量PCR方法检测病毒载量.[结果]感染呼吸型IBV强毒后,鸡出现轻微呼吸道症状,剖检无明显病理变化.在感染14 d后,鸡血清抗体水平转阳且阳性率为100％.实时荧光定量PCR结果显示,对照组均未检测到病毒,攻毒组仅在感染14 d后的气管中检测到病毒且病毒载量低.与对照组相比,攻毒组脾脏中TLR1、TLR5、AvBD9和AvBD12基因表达量在感染后7 d均显著升高(P＜0.05),攻毒组法氏囊中TLR1、TLR2、TLR3、A0BD5和AvBD9基因表达量及气管中核转录因子-κB p65(NF-κB p65)、NF-κB c-Rel、AvBD5、AvBD9、AvBD11 和 AvBD13 基因表达量在感染 14 d 后均显著升高(P＜0.05).体外抗病毒结果显示,与转染空载体组相比,转染AvBD11的CEK细胞在感染24和48 h后病毒载量显著下调(P＜0.05),细胞上清的病毒载量在感染48 h后显著下调(P＜0.05);转染AvBD12的CEK细胞在感染12和24 h后病毒载量显著下调(P＜0.05),细胞上清的病毒载量在感染12和48 h后显著下调(P＜0.05),说明重组AvBD11和AvBD12在CEK细胞中具有抗IBV活性.[结论]呼吸型IBV强毒感染机体后增强了相关受体的基因表达和信号转导,上调了 AvBDs基因表达,加强了机体免疫反应.重组AvBD11和AvBD12具有抗病毒作用,为无抗饲料的配制及研究提供了新思路.

关键词：传染性支气管炎病毒(IBV)、鸡、Toll样受体、禽β-防御素、抗病毒作用

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分类号：S852.4(动物医学（兽医学）)

资助基金：黑龙江省自然科学基金项目;国家自然科学基金;黑龙江省现代农业产业技术协同创新推广体系

在线出版日期：2023-02-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共14页

页码：246-259