抑制miR-142-3p对奶山羊化学诱导乳腺上皮细胞泌乳功能的影响

摘要：

[目的]探索miR-142-3p对奶山羊化学诱导乳腺上皮细胞(chemical induced mammary epithelial cells,CiMECs)体外泌乳功能的调节作用,旨在为促进转基因乳腺生物反应器的发展以及"培养皿奶"的商业化生产奠定基础和提供新的思路.[方法]选取奶山羊耳缘成纤维细胞(GEFs)为研究材料,经单一小分子化合物TGFβR-1/ALK5的抑制剂(RepSox)诱导8 d后,分别从细胞的形态变化、特异性标记物免疫荧光染色以及油红O染色对其进行鉴定.之后运用脂质体转染技术在诱导成功的奶山羊CiMECs中分别转染miR-142-3p的抑制物(miR-142-3p inhibitor)及抑制物对照(inhibitor-NC),不转染的细胞作为空白对照(BC),转染24 h后,采用实时荧光定量PCR检测miR-142-3p的表达水平,CCK-8法检测细胞的增殖率,Western blotting检测β-酪蛋白(β-casein)的表达量,甘油三酯酶法测定甘油三酯的含量.[结果]GEFs诱导8 d后形成岛屿状多核仁样的上皮样聚集;免疫荧光染色结果显示,诱导后的GEFs表达乳腺上皮细胞(MECs)的特异性标记物细胞角蛋白14(CK14)和CK18;油红O染色结果显示,诱导后的GEFs细胞质内弥散分布着大小不等被染上红色的脂滴,表明成功获得了具有泌乳功能的奶山羊CiMECs.奶山羊CiMECs转染试验结果显示,与空白对照组相比,miR-142-3p inhibitor组miR-142-3p的相对表达量显著降低(P＜0.05),inhibitor-NC 组 miR-142-3p 表达量无显著差异(P＞0.05);miR-142-3p inhibitor 组奶山羊CiMECs的增殖率、β-casein表达量及甘油三酯分泌量均显著增加(P＜0.05),inhibitor-NC组奶山羊CiMECs的增殖率、β-casein表达量及甘油三酯分泌量均无显著差异(P＞0.05).[结论]GEFs经RepSox诱导8 d可成功转变为具有泌乳功能的奶山羊CiMECs,抑制miR-142-3p可显著促进奶山羊CiMECs的增殖并增加p-casein表达量及甘油三酯的分泌量,从而影响泌乳功能.

关键词：奶山羊、乳腺上皮细胞(MECs)、miR-142-3p

所属期刊栏目：50

分类号：S827(家畜)

资助基金：国家自然科学基金31960160

在线出版日期：2023-02-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：58-66