嵌合犬瘟热病毒H基因的重组狂犬病病毒的构建及免疫原性研究

摘要：

[目的]构建表达犬瘟热病毒(CDV)血凝素蛋白H基因的重组狂犬病病毒(RABV),并研究其生物学特性及免疫原性.[方法]在RABV HEP-dG株基因组G与L基因之间插入CDV H基因,构建重组全长cDNA质粒pHEP-dG(H).将pHEP-dG(H)与辅助质粒共同转染BHK细胞,拯救携带CDV H基因的重组RABV HEP-dG(H).将重组病毒接种BHK细胞,分析病毒的扩散能力;将重组病毒接种小鼠,分析病毒的致病性和免疫原性.[结果]RT-PCR及直接免疫荧光显示,传至第3代的病毒仍能检测到H基因,表明CDV H基因已成功插入RABV基因组中,并在HEP-dG(H)中稳定遗传和正确表达.HEP-dG(H)在BHK细胞中的生长曲线与HEP-dG毒株相似,病毒滴度在96 h达到峰值,但HEP-dG(H)的滴度在每个时间点略低于HEP-dG.以感染复数(MOI)为0.005感染BHK细胞,HEP-dG(H)的扩散能力比HEP-dG毒株低.HEP-dG(H)与HEP-dG对6周龄成年小鼠均不致死,但HEP-dG(H)对成年小鼠体重的影响弱于HEP-dG.HEP-dG(H)与HEP-dG均能诱导小鼠产生抗RABV的中和抗体,免疫后7 d抗体已达到保护水平(0.5 EU/mL);此外,HEP-dG(H)可诱导产生CDV中和抗体.HEP-dG(H)与HEP-dG免疫小鼠3周后,均能抵御RABV标准攻毒毒株CVS-24的攻击.[结论]本研究成功构建重组RABV HEP-dG(H),其具有良好的免疫原性和安全性,可作为RABV-CDV新型二联基因工程候选疫苗.

关键词：狂犬病病毒(RABV)、犬瘟热病毒(CDV)、H基因、狂犬病灭活疫苗(dG株)、免疫原性

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分类号：S852.65+5(动物医学（兽医学）)

资助基金：岭南现代农业科学与技术广东省实验室肇庆分中心自主项目P20211154-0303

在线出版日期：2023-02-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：4776-4785