circRNA-Zfp609 对 C2C12 成肌细胞增殖和分化的影响

摘要：

[目的]试验旨在探究circRNA-Zfp609调节C2C12成肌细胞增殖和分化的潜在分子机制.[方法]利用RT-PCR和测序分析小鼠骨骼肌组织和C2C12成肌细胞中circRNA-Zfp609的表达,实时荧光定量PCR检测小鼠心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胃、小肠、骨骼肌组织及增殖12、24、36、48 h和分化0、1、3、5 d的C2C12成肌细胞中circRNA-Zfp609的相对表达量;实时荧光定量PCR检测分化0、1、3、5 d的C2C12成肌细胞中肌细胞生成素(MyoG)和肌球蛋白重链(MyHC)的相对表达量.用circRNA-Zfp609的干扰表达载体(siRNA)干扰细胞,通过CCK-8测定siRNA对C2C12成肌细胞增殖率的影响;用实时荧光定量PCR检测siRNA干扰对circRNA-Zfp609、MyoG和MyHC相对表达量的影响.通过TargetScan 7.0和miRDB软件预测circRNA-Zfp609上与肌肉分化相关的miRNA位点,将筛选的miRNAs的过表达载体转染HEK293T细胞,利用双荧光素酶报告试验验证circRNA-Zfp609 与 miRNA 的互作关系.根据 miRNAs 对 circRNA-Zfp609 的互作,构建 circRNA-Zfp609 的野生型和突变型载体并转染HEK293T细胞,利用双荧光素酶报告试验验证circRNA-Zfp609对miRNA的靶向关系.[结果]PCR和测序结果表明,小鼠骨骼肌中可表达circRNA-Zfp609;circRNA-Zfp609在小鼠骨骼肌中表达水平最高,在其他组织中的表达量由高到低依次是肾脏、肺脏、心脏、肝脏、胃、脾脏和小肠.与12 h相比,在C2C12成肌细胞增殖的36和48 h circRNA-Zfp609的相对表达量显著增加(P＜0.05);与分化第0天相比,在C2C12成肌细胞分化的第1、3和5天circRNA-Zfp609的相对表达量均显著增加(P＜0.05),MyoG、MyHC的相对表达量均极显著增加(P＜0.01).与NC组相比,siRNA组C2C12成肌细胞的增殖率和circRNA-Zfp609相对表达量均极显著降低(P＜0.01),MyoG 和 MyHC 的相对表达量显著降低(P＜0.05).circRNA-Zfp609 上有 miR-150-5p、miR-327、miR-344g-3p和miR-615-5p 4种与肌肉分化相关的miRNAs.circRNA-Zfp609与miR-615-5p的吸附能力最强,具有靶向结合作用.circRNA-Zfp609可以作为分子海绵与调控肌肉分化相关的miR-615-5p相互作用.[结论]circRNA-Zfp609在小鼠的组织中广泛表达,在骨骼肌中表达水平最高;circRNA-Zfp609在C2C12成肌细胞增殖和分化的不同时期差异表达,circRNA-Zfp609上有4个与肌肉分化相关的miRNAs,其中miR-615-5p与circRNA-Zfp609具有靶向关系.本研究结果可为与家畜骨骼肌生长发育相关的研究提供参考.

关键词：circRNA-Zfp609、C2C12成肌细胞、细胞增殖、细胞分化、miR-615-5p

所属期刊栏目：49

分类号：S813.1(普通畜牧学)

资助基金：国家重点实验室开放基金MYSKLKF201901

在线出版日期：2023-02-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：4535-4544