芒果苷抗DHAV-1致鸭胚肝细胞炎性损伤的研究

摘要：

[目的]探究芒果苷(mangiferin,Man)对鸭甲型肝炎病毒1型(Duck hepatitis A virus-1,DHAV-1)致鸭胚肝细胞(DEHCs)炎性损伤的影响.[方法]从14日龄SPF级麻鸭鸭胚肝脏组织分离原代DEHCs,用含不同浓度芒果苷(0、5、10、20、40、80和160 μmol/L)的培养液培养48 h后,通过CCK-8法检测其安全浓度范围;用安全浓度的芒果苷培养DEHCs 12、24和48 h后,检测培养液上清中乳酸脱氢酶(LDH)的活力,判定芒果苷对DEHCs的毒性作用.将DEHCs分为对照组(Mock)、模型组(Model)、芒果苷组(Man10、Man20和Man40)和利巴韦林组(Rib),每组3个重复,所有组细胞血清饥饿培养12 h后,Mock组加入含10％胎牛血清(FBS)的DMEM培养基,Model、Man10、Man20、Man40 和 Rib 组用 DHAV-1(MOI=1.0)攻毒 2 h 后,Model 组更换为含 10％FBS 的 DMEM 培养基,Man10、Man20、Man40培养基中分别添加10,20和40 μmol/L芒果苷,Rib组添加1 μmol/L利巴韦林.48 h后收集各组细胞,用比色法检测丙二醛(MDA)含量及过氧化氢酶(CAT)、总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)、总一氧化氮合酶(T-NOS)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性;免疫荧光(IF)法检测DHAV-1在各组DEHCs中的分布情况;Western blotting法检测NLRP3/Pro-Caspase1/IL-1β通路蛋白的表达情况.提取2日龄SPF麻鸭的新鲜全血,分离鸭外周血单个核细胞(duPBMCs),duPBMCs分组及处理同DEHCs,ELISA法检测各组duPBMCs上清液中白介素8(IL-8)和IL-1β的含量.[结果]与0 μmol/L芒果苷组相比,80和160 μmol/L芒果苷组细胞的增殖能力显著降低(P＜0.05),因此5～40 μmol/L芒果苷为处理DEHCs的安全给药浓度.20和40 μmol/L芒果苷处理48 h细胞上清液中LDH活力显著低于处理12和24 h(P＜0.05),20和40 μmol/L芒果苷处理12和24 h细胞上清液中LDH活力显著高于5和10 μmol/L芒果苷处理(P＜0.05),各浓度芒果苷处理48 h细胞上清液中LDH活力均差异不显著(P＞0.05),故48 h为最适处理时间.与Mock组相比,Model组DEHCs中CAT、T-AOC、SOD和GSH-Px活性均显著降低(P＜0.05),DEHCs中 MDA 含量、T-NOS 活性、DHAV-1 拷贝数、DHAV-1阳性率、NLRP3表达量及duPBMCs中IL-8、IL-1β分泌量均显著升高(P＜0.05).与Model组相比,Man10、Man20 和 Man40 组 DEHCs 中 CAT、T-AOC、SOD 和 GSH-Px 活性均显著提高(P＜0.05),DEHCs 中MDA含量、T-NOS活性、DHAV-1拷贝数、DHAV-1阳性率、NLRP3表达量及duPBMCs中IL-8、IL-1β分泌量均显著降低(P＜0.05).[结论]芒果苷可通过增加抗氧化能力、降低DHAV-1的复制水平、抑制NLRP3通路的激活、降低促炎细胞因子的释放抗DHAV-1感染DEHCs造成的炎性损伤.

关键词：芒果苷、鸭甲型肝炎病毒1型(DHAV-1)、鸭胚肝细胞、鸭外周血单个核细胞

所属期刊栏目：49

分类号：R285.5(中药学)

资助基金：江苏省水禽产业技术体系集成创新中心项目;江苏高校协同创新中心项目;江苏省高等学校基础科学自然科学研究重大项目;江苏农牧科技职业学院科研项目

在线出版日期：2023-01-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：4485-4494