犬轮状病毒单克隆抗体制备及胶体金试纸条检测方法的建立

摘要：

[目的]研发犬轮状病毒(Canineratavirus,CRV)免疫学诊断试剂,制备并鉴定CRV特异性单克隆抗体,建立可用于检测CRV的胶体金免疫层析法.[方法]以CRV临床分离株SL006株为免疫原免疫BALB/c雌性小鼠,用杂交瘤细胞法进行细胞融合,通过间接免疫荧光法(IFA)筛选可稳定分泌CRV单克隆抗体的杂交瘤细胞,并制备腹水,亲和层析法进行纯化获得单克隆抗体.对获得的单克隆抗体进行鉴定,经条件优化建立胶体金试纸条检测方法,对试纸条的灵敏度、特异性、重复性和应用情况进行评价.[结果]获得了 4株杂交瘤细胞,分别命名为2C12、4A5、1H3、5F3,IFA效价分别为 1∶6 400、1∶12 800、1∶1 600 和 1∶3 200;重链亚类分别为 IgG2b、IgG2a、IgG1和IgG2a,轻链亚类均为kappa;制备的胶体金试纸条检测线包被单克隆抗体4A5,对照线包被羊抗鼠IgG,金标垫包被胶体金标记的单克隆抗体2C12,对CRV病毒液的检测灵敏度为104.2 TCID50/mL,检测犬源其他病毒犬细小病毒(Canine parvovirus,CPV)、犬副流感病毒(Canine parainfluenza virus,CPIV)、犬腺病毒 Ⅰ 型(Canine adenovirus-Ⅰ,CAV-Ⅰ)、CAV-Ⅱ、犬瘟热病毒(Canine distemper virus,CDV)病毒液及 CRV 阴性肛拭子和阴性粪便均为阴性;批内和批间重复性良好;利用制备的胶体金试纸条和RT-PCR方法对47份样品进行检测比较,两者符合率为93.6％.[结论]本研究建立的CRV胶体金试纸条检测方法具有良好的敏感性、特异性、重复性,与RT-PCR方法符合率较高,可为CRV的临床快速诊断提供有效的检测方法.

关键词：犬轮状病毒(CRV)、单克隆抗体、胶体金试纸条

所属期刊栏目：49

分类号：S852.65+5(动物医学（兽医学）)

资助基金：河洛英才计划

在线出版日期：2023-01-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：4429-4437