猪流行性腹泻病毒S蛋白原核表达及多克隆抗体的制备与鉴定

摘要：

[目的]探索猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)S蛋白的结构和功能,为建立PEDV感染的诊断方法和疫苗开发提供理论依据.[方法]以PEDV经典CV777株为模板,通过PCR扩增获得S、S1基因片段;PCR扩增产物分别克隆pET-30a(+)原核表达载体和pFLAG-CMV-3真核表达载体,构建原核表达质粒 pET-30a-PEDV-S 和真核表达质粒 pFLAG-CMV-3-PEDV-S1;将 pET-30a-PEDV-S 转化大肠杆菌 BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达PEDV-S重组蛋白,通过变性、复性、浓缩纯化重组蛋白并进行Western blotting检测;将PEDV-S重组蛋白免疫C57BL小鼠制备多克隆抗体,获得的多克隆抗体经间接免疫荧光试验(IFA)检测特异性,通过间接ELISA法检测多克隆抗体效价;将pFLAG-CMV-3-PEDV-S1转染至HEK293T细胞,以制备的多克隆抗体为一抗,经IFA测定PEDV-S1蛋白的抗原性和多克隆抗体的反应性.[结果]成功克隆出PEDV S和S1基因,构建了可表达PEDV-S重组蛋白的原核表达质粒和在HEK293T细胞中高效表达S1蛋白的真核表达质粒;PEDV-S重组蛋白在IPTG为0.5 mmol/L、16℃诱导8 h条件下可获得最高表达量,主要以包涵体形式存在;Western blotting结果显示,PEDV-S重组蛋白成功表达;ELISA检测结果显示,制备的多克隆抗体效价达1∶3 280 500;IFA结果显示,多克隆抗体有良好的特异性,可特异性识别PEDV-S 和 PEDV-S1蛋白.[结论]本研究获得了 PEDV-S重组蛋白,并成功表达S1蛋白,制备出PEDV-S蛋白多克隆抗体,为研究S蛋白的结构和功能提供了条件,为揭示PEDV致病机制奠定了基础.

关键词：猪流行性腹泻病毒(PEDV)、S蛋白、蛋白纯化、原核表达、多克隆抗体

所属期刊栏目：49

分类号：S852.65+1(动物医学（兽医学）)

资助基金：辽宁省自然科学基金2021-MS-334

在线出版日期：2023-01-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：4383-4391