E3泛素连接酶RNF185对A亚群禽白血病病毒体外复制的影响

摘要：

[目的]环指蛋白185(ring finger protein 185,RNF185)是Ring家族E3泛素连接酶的一员.试验旨在探明鸡源RNF185对A亚群禽白血病病毒(Avian leukemia virus subgroup A,ALV-A)体外复制的影响,为进一步研究鸡源RNF185对ALV-A致病性的影响和介导的致瘤机制提供参考.[方法]参考GenBank中已公布的鸡RNF185基因(登录号:NP_001007841)序列分别设计RNF185过表达引物和RNF185单链shRNA,通过PCR扩增RNF185基因及合成双链shRNA,将其分别克隆至真核表达载体psi-flag和干扰载体pLKO.1-GFP,并使用PCR、双酶切和测序等方法验证重组质粒.使用Western blotting验证重组质粒的表达和干扰效果,并使用CCK-8试剂盒检测重组质粒对DF-1细胞活性的影响.在RNF185过表达和干扰后的DF-1细胞中分别接种104 半数组织感染剂量(TCID50)ALV-A(rHB2015012)病毒液,于接种完成后3、4和5 d收取细胞,并使用Western blotting检测ALV-A的病毒载量.[结果]PCR成功扩增出RNF185基因,单链shRNA经退火后形成双链shRNA,并成功构建重组质粒 psi-flag-RNF185、pLKO.1-RNF185-1 和 pLKO.1-RNF185-2.Western blotting 结果表明,构建的过表达和干扰质粒能够在DF-1细胞中稳定表达和干扰RNF185.CCK-8结果表明,过表达和干扰RNF185不影响DF-1细胞的活性.RNF185过表达可以促进ALV-A在DF-1细胞中的复制,干扰RNF185表达可以抑制ALV-A在DF-1细胞中的复制.[结论]本研究构建了可以在DF-1细胞中高效表达和干扰RNF185的过表达质粒和干扰质粒,RNF185对DF-1细胞增殖无明显影响,能够促进ALV-A(rHB2015012)在体外的复制.

关键词：环指蛋白185(RNF185)、A亚群禽白血病病毒(ALV-A)、病毒复制

所属期刊栏目：49

分类号：S852.65+7(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金;湖北省自然科学基金

在线出版日期：2023-01-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：4364-4371