灵芝漆酶在黑曲霉中的重组表达及发酵条件优化

摘要：

[目的]在黑曲霉(A.niger)中重组表达灵芝L菌漆酶基因,并对其发酵条件进行优化,旨在获得一株高产灵芝漆酶的黑曲霉基因工程菌.[方法]从灵芝L菌克隆漆酶基因Lac-L,并根据黑曲霉密码子偏好性进行优化.选用黑曲霉糖化酶启动子(PglaA)、信号肽及终止子为表达原件,以米曲霉pyrG基因为筛选标记,构建漆酶表达盒,采用聚乙二醇-CaCl2法将其转化至黑曲霉X1(ΔpyrG)原生质体中.对转化子进行PCR验证及固态发酵酶活测定,筛选高产漆酶重组菌株,并对阳性转化子固态发酵培养基碳源、无机与有机氮源比例、Cu2+浓度及发酵时间进行优化.[结果]经尿嘧啶缺陷及含2,2'-联氮-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐(2,2'-azinobis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid ammonium salt),ABTS)培养基筛选获得25株重组漆酶转化子,酶活复筛获得灵芝漆酶异源表达6号重组菌株,发酵72 h酶活可达3 532.6 U/kg,宿主菌株的酶活仅为58.37 U/kg.重组6号菌优化后的最适固态发酵条件为:以麸皮为基础培养基,添加2％麦芽糖、2％(NH4)2SO4、0.25 g/L CuSO4,发酵60 h时重组菌株产漆酶活力最高,达到6 255.47 U/kgo[结论]在黑曲霉中成功实现灵芝L菌漆酶基因Lac-L的异源表达.

关键词：漆酶、黑曲霉、异源表达、发酵条件

所属期刊栏目：49

分类号：Q814(生物工程学(生物技术))

资助基金：国家重点研发计划;国家重点研发计划;中国农业科学院科技创新工程专项

在线出版日期：2023-01-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：4218-4227