口蹄疫病毒感染与免疫鉴别诊断及免疫评价二联试纸的优化

摘要：

[目的]建立口蹄疫病毒(FMDV)感染与免疫鉴别诊断及免疫评价二联试纸稳定的生产工艺,促进其产业化生产及临床应用.[方法]本研究以胶体金免疫探针结合猪IgG,FMDV结构蛋白(SP)及非结构蛋白(NSP)的表位多肽偶联载体蛋白制备人工抗原,设置两条检测线精准拦截抗体的检测模式,以试纸条特异性及敏感性为评价指标,对胶体金免疫探针用蛋白、试纸拦截用多肽抗原、检测线位置及喷膜缓冲液、金标蛋白保存液、样品垫缓冲液以及样品稀释液等参数进行优化.采用优化后的试纸检测266份田间猪血清样品,并与口蹄疫0型抗体液相阻断ELISA检测试剂盒(LPB ELISA)和3ABC阻断ELISA抗体检测试剂盒(3ABC ELISA)检测结果进行对比,计算该试纸与商品ELISA试剂盒的符合率.[结果]经优化后,口蹄疫感染与免疫鉴别诊断及免疫评价二联试纸生产工艺参数如下:以胶体金标记金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)为免疫探针;选择混合多肽的形式设置拦截线,以非结构蛋白多肽(BSA-NSPs)喷涂T1线,结构蛋白多肽(BSA-SPs)喷涂T2线,以0.1 mol/L Tris-HCl为喷膜缓冲液;以ddH20 含 15 mg/mL BSA、13.25 mg/mL Na2 HPO4·12H2O、15.9 mg/mL NaH2PO4·2H2O、10％Trition X-100 和0.3 mg/mL NaN3 为金标蛋白保存液;以 0.02 mol/L Na2B4O7·10H2O 含 10 mg/mL 酪蛋白、5％Trition X-100、0.3 mg/mL NaN3为样品垫缓冲液;以生理盐水含1.0％Tween-20为样品稀释溶液.制备的FMDV感染与免疫鉴别诊断及免疫评价二联试纸与3ABC阻断ELISA抗体检测试剂盒的符合率为96.20％,与口蹄疫O 型抗体液相阻断ELISA检测试剂盒的符合率为94.36％.[结论]通过对试纸生产工艺的优化,建立了稳定的生产工艺,制备的二联试纸检测线显色清晰可见,肉眼识别度高,试纸的检测特异性和敏感性良好.本研究为该试纸的批量生产和产业化应用奠定了基础,为基层口蹄疫的检测提供了稳定、特异、敏感、准确的检测方法.

关键词：口蹄疫病毒(FMDV)、抗体、试纸、优化

所属期刊栏目：49

分类号：S852.4(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家重点研发计划;河南省农业科学院基本科研业务费项目

在线出版日期：2022-11-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：3953-3962