10.16431/j.cnki.1671-7236.2022.03.011
猫血清白蛋白在毕赤酵母中的分泌表达
[目的]在毕赤酵母中构建猫血清白蛋白(feline serum albumin,FSA)表达系统,并探索其最适的基本表达条件,为FSA的生产提供一种新方法.[方法]在GenBank上获取FSA碱基序列,进行密码子优化并合成,将优化的密码子构建到载体pPIC9K上,经PCR和双酶切验证后通过电击转化将重组质粒FSA-pPIC9K转化毕赤酵母GS115,依次经MD平板和G418筛选后进行菌落PCR获得阳性菌株,随机选取阳性菌株经甲醇诱导表达96h后,取表达上清液进行Western blotting验证.选取表达量较高的菌株分别在不同温度(24、26、28和30℃)、pH(4.0、5.0、6.0、7.0和8.0)和甲醇诱导量(其中1组为每24 h添加0.5%,其余4组为每12 h分别添加0.5%、1.0%、1.5%和2.0%)的条件下诱导表达96 h,取表达上清液进行Western blotting验证.[结果]菌落PCR结果显示,获得2条大小分别约为2.3和2.2 kb的目的基因条带和毕赤酵母AOX1基因扩增条带,诱导表达96 h后取表达上清液进行Western blotting验证,在70 ku左右出现特异性条带.通过基本条件优化发现该蛋白在28℃,pH为6.0且每12 h添加0.5%的甲醇条件下表达量较高.[结论]毕赤酵母GS115可稳定表达FSA.
猫血清白蛋白(FSA);毕赤酵母;分泌表达
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Q78(基因工程(遗传工程))
广东省自然科学基金;广东省普通高校动物干细胞工程技术研究中心项目
2022-03-21(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
共7页
897-903