基于RNA-Seq数据分析葡萄糖诱导绵羊卵泡颗粒细胞衰老的差异表达基因

摘要：

[目的]探讨葡萄糖对绵羊卵泡颗粒细胞衰老及其基因表达的影响.[方法]将原代分离培养的绵羊卵泡颗粒细胞分别用含17.5(H组)和2 mmol/L(L组)葡萄糖的培养基进行体外培养,细胞处理72 h后,利用β-半乳糖苷酶染色检测细胞衰老,采用RN A-Seq技术进行转录组测序,对差异表达基因进行GO功能富集分析和KEGG通路富集分析,并用实时荧光定量PCR验证锚定蛋白重复域蛋白1(AN KRD1)、白细胞介素8(IL-8)、催产素(OXT)、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(NOX4)基因的表达量.[结果]H组β-半乳糖苷酶染色阳性细胞率极显著高于L组(P＜0.01).转录组测序结果显示,两组间存在401个差异表达基因,其中上调基因153个,下调基因248个,高糖诱导的细胞异常相关基因 9个,细胞周期相关基因6个.GO功能富集分析发现,差异表达基因参与了细胞过程、生物调节、代谢过程、多细胞生物过程及细胞运动等生物过程,在细胞成分上主要富集在胞外区、膜、突触、细胞器及超分子复合体等,在分子功能主要富集在催化活性、整合、转运活性、分子功能调节剂及结构分子活性等.KEGG信号通路富集分析发现,差异表达基因主要富集在糖尿病并发症中的晚期糖基化产物(AGE)-晚期糖基化终末产物受体(RAGE)信号通路、肿瘤坏死因子(TNF)信号通路、过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)信号通路等.实时荧光定量PCR结果表明,与L组相比,H组IL-8基因表达水平极显著上调(P＜0.01),ANKRD1基因表达水平显著上调(P＜0.05),OXT基因表达水平极显著下调(P＜0.01),NOX4基因表达量呈上升趋势,但差异不显著(P＞0.05),实时荧光定量PCR结果与转录组测序结果一致.[结论]17.5 mmol/L葡萄糖可诱导绵羊卵泡颗粒细胞衰老及衰老相关基因表达变化,为葡萄糖诱导颗粒细胞衰老的功能和分子机制提供了依据.

关键词：RNA-Seq;葡萄糖;绵羊;颗粒细胞;衰老

所属期刊栏目：49

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：河北省自然科学基金;河北农业大学精准畜牧学科群

在线出版日期：2022-03-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：631-640