非洲猪瘟病毒360-12L蛋白的原核表达及其多克隆抗体制备

摘要：

[目的]获得抗原性好的非洲猪瘟病毒(African swine fever virus)12L蛋白用于ASFV血清学诊断技术研究.[方法]根据GenBank ASFV参考序列(登录号:NC_044959.2)合成360-12L基因,并插入pET-28a(+)载体,构建原核表达质粒pET-28a-12L,将经测序鉴定正确的质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞进行诱导培养,筛选最佳诱导温度,同时分析其可溶性.随后通过亲和层析纯化蛋白,并对所获得的12L重组蛋白进行SDS-PAGE分析.将获得的12L重组蛋白作为免疫原免疫BALB/c雌性小鼠,以获得鼠抗ASFV 12L蛋白的多克隆抗体,通过间接ELISA方法测定所制备的多克隆抗体效价,并用间接免疫荧光试验进行验证.[结果]成功构建了ASFV 12L蛋白原核表达质粒,重组菌pET-28a-12L-BL21在37℃6 h时表达量较高,主要以包涵体形式表达,可在54.7 ku处出现明显条带.间接ELISA结果显示,制备的鼠抗ASFV 12L蛋白多克隆抗体效价＞1∶512 000,间接免疫荧光试验结果表明,所制备的鼠抗ASFV 12L蛋白多克隆抗体具有良好的特异性,可特异性识别12L重组蛋白.[结论]原核表达的12L重组蛋白具有良好的免疫原性,制备的鼠抗ASFV 12L蛋白的多克隆抗体具有较高的反应性和特异性,为进一步研究12L蛋白的生物学功能、ASFV血清学诊断技术和疫苗研究提供生物材料.

关键词：非洲猪瘟病毒(ASFV)、原核表达、12L重组蛋白、多克隆抗体

所属期刊栏目：49

分类号：S852.65+1(动物医学（兽医学）)

资助基金：非洲猪瘟等外来动物疫病防控科技支撑;中国农业科学院基本科研业务费专项

在线出版日期：2022-04-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：352-360