马脐带不同部位间充质干细胞的分离培养及成软骨诱导分化

摘要：

[目的]通过对比马雌性胎儿同一脐带3个不同部位分离的脐带间充质干细胞(umbilical cord mesenchymal stem cells,UC-MSCs)的增殖率、表面标记分子、多潜能性基因表达和软骨分化潜能的差异性,明确更适合作为分离培养间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)的马脐带部位.[方法]采用组织块分离法分离脐带靠近胎儿的部分(近端)、整段脐带的中心(中段)和靠近胎盘部分(远端)3个部分的MSCs,通过绘制细胞生长曲线对比UC-MSCs的增殖能力,通过实时荧光定量PCR检测多潜能性基因和表面标记分子的表达,经软骨诱导检测成软骨分化的潜能.[结果]近端、中段和远端分离得到的MSCs均贴壁生长,呈成纤维状;细胞倍增时间分别为35.4、25.5和34.9 h,且都表达多潜能性基因NANOG(NANOG homeobox)、八聚体结合转录因子(POU class 5 homeobox 1,POU5F1)和 Y染色体性别决定区基因盒2(SRY-box transcription factor 2,SOX2),高表达5'-核苷酸外切酶(5'-nucleotidase ecto,CD73)、Thy-1 细胞表面抗原(Thy-1 cell surface antigen,CD90)、内皮糖蛋白(endoglin,CD105)和造血祖细胞抗原(CD34 molecule,CD34),低表达单核细胞分化抗原CD14(CD14 molecule,CD14)、B-淋巴细胞表面抗原 B4(CD19 molecule,CD19)、蛋白酪氨酸磷酸酶受体 C 型(protein tyrosine phosphatase receptor type C,CD45)和B细胞抗原受体复合物相关蛋白α链(CD79a molecule,CD79a).多潜能性基因NANOG相对表达量在P1代中段细胞显著高于近端细胞(P＜0.05),POU5F1相对表达量在P5代近端细胞显著高于中段细胞(P＜0.05),且极显著高于远端细胞(P＜0.01).CD14、CD19、CD73和CD90的相对表达量在P5代近端细胞均显著或极显著高于中段和远端细胞(P＜0.05;P＜0.01);CD34、CD79a的相对表达量在P5代远端细胞均显著或极显著高于近端和中段细胞(P＜0.05;P＜0.01).近端、中段和远端分离得到的UC-MSCs均可诱导分化为软骨细胞,在诱导分化第14天,近端细胞SOX9的相对表达量极显著高于远端细胞(P＜0.01),诱导21 d时远端细胞SOX9的相对表达量极显著高于中段细胞(P＜0.01);在诱导第7和14天,中段细胞蛋白聚糖(aggrecan,ACAN)和Ⅱ型胶原蛋白1链(collagen type Ⅱ alpha 1 chain,COL2A1)相对表达量均极显著高于近端和远端细胞(P＜0.01),第21天时显著高于近端和远端细胞(P＜0.05).[结论]马脐带的近端、中段和远端均可用于制备MSCs,都表达多潜能性基因和MSCs表面标记分子,且均可诱导分化为软骨细胞,中段MSCs增殖能力和软骨分化潜能优于近端和远端,更适合用于分离MSCs.

关键词：马、脐带间充质干细胞(UC-MSCs)、多潜能性、表面标记分子、成软骨分化

所属期刊栏目：49

分类号：Q254(细胞生理学)

资助基金：自治区重大科技专项项目;自治区自然科学基金

在线出版日期：2022-04-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共11页

页码：70-80