10.16431/j.cnki.1671-7236.2021.11.003
绵羊SUN2基因生物信息学分析及其在A549细胞中的表达
本研究旨在克隆绵羊SUN2(Sad1 and UNC84 domain containing 2)基因并进行生物信息学分析,构建真核表达载体并检测其在A549细胞中的表达.根据绵羊SUN2基因序列(GenBank登录号:XM_015095026.2)设计特异性引物,应用RT-PCR方法扩增并克隆绵羊SUN2基因CDS序列,测序鉴定后对其进行生物信息学分析,并构建pEGFP-C1-SUN2重组质粒.利用脂质体转染方法将pEGFP-C1-SUN2重组质粒转染至A549细胞并检测其表达.结果 显示,绵羊SUN2基因CDS区序列全长2187 bp,编码728个氨基酸,理论分子质量为81.06 ku,分子式为C3593 H5639 N1031 O1110 S14,等电点(pI)为6.20,总原子数为11387,不稳定系数为56.88,属于不稳定蛋白.绵羊SUN2基因序列与山羊、牛、猪、马、家犬、大鼠、小鼠及人的相似性分别为98.9%、97.2%、91.6%、90.6%、87.1%、82.4%、82.1%和86.1%,不同物种间基因相似性较高,进化过程中相对保守.系统进化树分析表明,绵羊SUN2基因与山羊、牛、猪、马和家犬等哺乳动物的遗传距离相对较近,与鸡的遗传距离较远.结构域及跨膜结构域预测显示,绵羊SUN2蛋白含有1个高度保守的SUN结构域,且存在跨膜结构域.信号肽预测显示其不存在信号肽位点,疏水性分析为亲水性蛋白,氨基酸序列二级结构主要为α-螺旋(51.65%),其余为无规则卷曲(31.46%)、延伸链(12.36%)和β-转角(4.53%).试验成功构建了绵羊SUN2基因真核表达载体pEGFP-C1-SUN2,将其转染至A549细胞并检测到蛋白表达.本试验结果为绵羊SUN2基因功能的研究提供了参考依据,为后续探究SUN2基因在绵羊肺腺瘤病中的作用奠定了基础.
绵羊;SUN2基因;载体构建;生物信息学分析;转染
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Q78(基因工程(遗传工程))
国家自然科学基金面上项目"绵羊肺腺瘤病毒LTR调控病毒转录与核膜蛋白SUN2互作机制的研究"32072819
2022-01-04(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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