表达A亚群禽白血病病毒Gp85蛋白的乳酸菌的构建

摘要：

本研究旨在构建乳酸菌表达载体以研制A亚群禽白血病病毒(Avian leukosis virus subgroup A,ALV-A)的活菌疫苗,用于预防禽白血病.使用锚定表达载体构建2株分别表达gp85和gp85-DCpep基因的重组植物乳杆菌,以感染ALV-A的DF-1细胞的基因组DNA为模板,使用PCR方法扩增ALV-A Gp85蛋白的编码基因gp85,将树突状细胞靶向肽(DC-targeting peptide,DCpep)编码基因与gp85基因进行融合,获得gp85-DCpep基因;使用乳酸菌锚定表达载体pSIP409-pgsA'通过同源重组的方法构建重组质粒pSIP409-pgsA'-gp85-DCpep和pSIP409-pgsA'-gp85;经测序正确后将上述质粒分别电转化植物乳杆菌NC8感受态细胞,获得重组植物乳杆菌;使用SppIP诱导重组植物乳杆菌的表达,收集处于对数生长期的菌体,通过反复冻融获取细胞膜的蛋白样,采用Western blotting技术检测pgsA'-gp85-DCpep和pgsA'-gp85蛋白的表达情况.结果显示,试验成功获得基因片段gp85和gp85-DCpep,构建的重组质粒pSIP409-pgsA'-gp85-DCpep和pSIP409-pgsA'-gp85测序无突变和丢失情况,并成功电转到植物乳杆菌NC8感受态细胞中,使用SDS-PAGE和Western blotting技术在细胞膜蛋白样中检测到蛋白的表达,大小分别为48.3(pgsA'-gp85-DCpep)和47 ku(pgsA'-gp85).本试验成功构建了重组质粒pSIP409-pgsA'-gp85-DCpep和pSIP409-pgsA'-gp85,获得的重组植物乳杆菌NC8-pSIP409-pgsA'-gp85-DCpep和NC8-pSIP409-pgsA'-gp85中的蛋白均成功表达,且具有反应原性,为后期深入研究重组植物乳杆菌在抗ALV-A感染中的保护机制奠定良好的基础.

关键词：A亚群禽白血病病毒(ALV-A);Gp85蛋白;植物乳杆菌;树突状细胞;锚定表达

所属期刊栏目：48

分类号：S852.65(动物医学（兽医学）)

资助基金：农业农村部畜禽细菌病防治制剂创制重点实验室开放课题;动物源乳酸菌的分离鉴定及其调控雏鸡免疫机能的机制

在线出版日期：2021-09-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：3456-3463